PDF《Caspase-3 活性测试盒说明书》

南京建成生物工程研究所(本试剂盒仅用于科研) www.

njjcbio.com 公司地址:南京市玄武区中央路 258-27 号新立基大厦 邮政编码:210009 E-Mail:njjcbio@vip.163.com 联系

电话:025-

83360321、

83360969、83551389 技术支持:025-83360272 传真号码:025-83227943 Caspase-3 活性测试盒说明书 (货号:G007 适用于酶标仪或分光光度计测定)

一、产品简介 本试剂盒采用分光光度计或酶标仪检测细胞或组织裂解液中 Caspase

3 酶活性或纯化的 Caspase

3 酶活性. Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的 蛋白酶家族.Caspase

3 也称 CPP

32、Yama 或apopain,有时被写作 caspase-3 或caspase3,属于caspase 家族的 CED-3 亚家族(CED-3 subfamily), 是细胞凋亡过程中的一个关键酶. Caspase

3 是哺乳动物细胞中研究最多的一个 caspase.Caspase

3 可以剪切 procaspase

2、

6、7 和9,并 可以直接特异性剪切许多 caspase 底物, 包括 PARP (poly(ADP-ribose) polymerase) , ICAD (Inhibitor of caspase-activated deoxyribonuclease), gelsolin 和fodrin 等. 这些由 caspase

3 介导的蛋白剪切是细胞凋亡分子机制的重要组成部分.另外,caspase

3 在细胞核凋亡过程中也 起到了关键作用, 包括染色质固缩(chromatin condensention) , DNA 片段化(DNA fragmentation) 等.同时 caspase

3 对细胞起泡(Cell blebbing)也起到关键作用.Caspase-3 在正常状态下以酶 原的形式存在于胞浆中,没有活性;

但在细胞发生凋亡阶段,它被激活,活化的 Caspase-3 由两 个大亚基和两个小亚基组成,裂解相应的胞浆胞核底物,最终导致细胞凋亡. Caspase-3 检测试剂盒就是将caspase-3 序列特异性的多肽(Ac-DEVD-pNA (acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide)偶联至黄色基团:pNA (p-nitroaniline);

当该底 物被 Caspase-3 剪切后, 黄色基团 pNA 即游离出来,可通过酶标仪或分光光度计(λ=405nm 或400nm)测定其吸光值,考察 caspase-3 的活化程度.pNA 在405nm 附近有强吸收. 本试剂盒适用于培养细胞及新鲜组织 caspase-3 活性的检测.

二、试剂盒组份 试剂规格 组份 20T 50T 100T 储存条件 裂解液 5.0ml 10.0ml 15.0ml 4℃保存 2*反应液 1.0ml 2.5ml 5.0ml 4℃保存 Ac-DEVD-pNA 100μl 250μl 500μl -20℃,避光保存 DTT 50μl 100μl 150μl -20℃保存

三、试剂盒以外自备仪器和试剂 低温高速离心机、酶标仪或分光光度计(100μL的比色皿) 、微量移液器、玻璃匀浆器(组织 样本)1.5m L离心管、PBS、蛋白定量试剂及仪器

四、保存条件:-20℃保存,Ac-DEVD-pNA需避光保存. 南京建成生物工程研究所(本试剂盒仅用于科研) www.njjcbio.com 公司地址:南京市玄武区中央路 258-27 号新立基大厦 邮政编码:210009 E-Mail:njjcbio@vip.163.com 联系

电话:025-

83360321、

83360969、83551389 技术支持:025-83360272 传真号码:025-83227943

五、注意事项:

1、须自备可以测定405nm或400nm的酶标仪或容量不超过100?l的比色皿及相应分光光度计.优先 考虑测定A405,如有困难可以测定400nm.

2、Ac-DEVD-pNA需尽量避免反复冻融,请注意适当分装和避光保存.

3、测定蛋白浓度需Bradford蛋白浓度测定试剂盒.

4、有文献报道少数类型的细胞凋亡检测不到caspase 3的激活.可能存在非依赖于Caspase-3活化 的机制,这种情况时利用本试剂盒检测Caspase-3活性无明显改变,需要考虑凋亡机制中的其 他信号通路.