PDF《跨界融合选育生物脱硫催化剂》

254 nm ,流 动相为

90 %的甲醇水溶液 ,流速为

1 mL/ min ,C18 色谱柱温为

25 ℃,进样量 20μ L .在使用条件下 ,测 定各标准 DBT 溶液浓度对应的峰面积 ,由色谱工作 站绘制成 DBT 浓度与对应峰面积的标准曲线 ,通过 测定各样品中 DBT 的峰面积即可确定 DBT 的量[9] . 2. 5.

5 原生质体融合 出发菌株为上述方法获得 的优势脱硫菌种经中国科学院微生物所鉴定为枯 草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp. ) ,以TL 表示 ;

白腐真菌由中国科学院微生物所提供. 原生质体融合过程为 :活化出发菌株 → 制备原生质 体→促融合 → 原生质体再生 → 检出融合子.凡是 在再生选择培养基上呈丝状生长的菌落 ,将其接种 到斜面培养基上

4 ℃ 冰箱保存[10 ,11 ] . 2. 5.

6 出发菌株和融合后丝状生长的菌株抗生素 抗性实验及其形态学比较 活化富集出发菌株和 融合后丝状生长的菌株 ,以鉴别培养基制成倾注平 板后 ,置于

32 ℃ 培养箱内培养观察 ,在鉴别

1、 鉴别2和鉴别

3 培养基内均呈丝状生长菌落可以认为 是融合子 ,将其接种到斜面培养基上冰箱保存备用. 2. 5.

7 融合子的筛选 融合子的筛选方法与 2. 5.

3 节相同. 2. 5.

8 融合子的增殖培养及稳定性检验 融合子 活化富集培养后离心分离收集融合子 ,取0.

5 g 湿 重融合子 ,接种于

100 mL 富集培养基中 ,置于恒 温振荡器内 ,在120 r/ min、

28 ℃ 条件下振荡培养

24 h 后 ;

离心分离收集富集培养后的融合子 ,取0.

5 g 湿重融合子 ,重新接种于

100 mL 富集培养基 内 ,相同条件振荡培养 ,收集融合子 ;

如此重复

5 个 周期.每1周期结束后检测融合子的脱硫能力 (方 法同融合子的筛选) ,观察融合子脱硫的稳定性. 2. 5.

9 脱硫融合子对成品油中有机硫的脱除实 验 脱硫融合子富集培养后离心收集菌体 ,将其 接种于

85 mL 无机盐培养基和

15 mL

93 号汽油混 合液中 ,置于恒温振荡器内 ,在120 r/ min、

28 ℃ 条 件下振荡培养

12 h 后 ,分离油相 ;

将分离获得的油 相 ,与重新接种脱硫融合子的

85 mL 无机盐培养 基混合 ,置于恒温振荡器内 ,在120 r/ min、

28 ℃ 条 件下振荡培养

12 h ;

如此循环

3 个周期.同时进行

7 2 第6期沈齐英等. 跨界融合选育生物脱硫催化剂 ? 1994-2007 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 以24 h 为1个周期的平行实验.循环

3 个周期结 束后 ,测定其有机相的总硫含量 ,再分别与循环脱 硫前总硫含量进行比较 ,观察融合子对

93 号汽油 中有机硫的脱除能力[12 ,13] . 将上述实验中的

15 mL

93 号汽油更换为

0 号 柴油 ,观察融合子对

0 号柴油中有机硫的脱除能力. 2. 5.

10 硫含量的测定

93 号汽油和

0 号柴油中 的总硫含量采用微库仑法测定.微库仑仪操作条 件 :汽化段温度为

600 ℃,燃烧段温度为

800 ℃,稳 定段温度

700 ℃,氮气流量为

150 mL/ min ,氯气流 量为

150 mL/ min.通过分析硫标准溶液 ,计算总 硫的转化率 ,消除三氧化硫未参加反应带来的误 差 ;

对未知试样进行测定 ,并进行计算后可求得未 知样品中的硫含量.实验中 DB T 浓度和油品硫含 量数据以均值表示 ,样本数量 n 为8,对脱硫前后 DB T 的量进行 T 检验.当概率 p >