PDF《跨界融合选育生物脱硫催化剂》

2 主要实验仪器 实验中培养基灭菌使用上海申安医疗机械厂 的不锈钢手提式灭菌器 ;

菌种的培养使用天津市泰 斯特仪器有限公司生产的 SH23600A 电热恒温培 养箱 ;

脱硫菌种的筛选、 富集等使用哈尔滨市东明 医疗仪器厂生产的 HZQ2C 恒温空气浴振荡器 ;

菌 体的收集使用北京医用离心机厂的 L GR1024.

2 型 冷冻离心机 ;

DB T 含量的确定使用北京彩陆科学 石油炼制与化工2007 年6月PETROL EUM PROCESSIN G AND PETROCHEMICALS 第38 卷第

6 期?1994-2007 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 仪器有限公司生产的 CL3010 高效毛细管电泳液 相色谱一体机. 2.

3 主要试剂 脱硫微生物驯化中使用的混合有机硫化合物 苯并噻吩、 二苯并噻吩、

4 ,62二甲基二苯并噻吩和 苯硫醚均为 ACROS 公司产品.原生质体融合实 验中使用的溶菌酶和蜗牛酶为中国科学院上海生 化所产品 ;

使用的青霉素和制霉菌素为 ACROS 公 司产品.测定 DB T 含量时使用的溶剂正十六烷为 德国 HAL TERMANN 公司产品. 2.

4 主要培养基 实验中使用的无机盐培养基、 富集培养基、 琼脂 平板培养基、 斜面培养基、 基本培养基、 完全培养基、 再生选择培养基的配方及配制方法见参考文献[4~6]. 鉴别培养基

1 为基本培养基中加入青霉素 (Penicillin ,Pc) ;

鉴别培养基

2 为基本培养基中加 入制霉菌素 (Nystatin ,Nt) ;

鉴别培养基

3 为基本 培养基中同时加入青霉素和制霉菌素. 2.

5 实验方法 2. 5.

1 脱硫微生物的驯化 取5g被原油污染的土 壤充分溶于

100 mL 生理盐水中 ,从中取出

10 mL 接种于

80 mL 无机盐培养基和

10 mL 原油混合液 中(原油中分别加入 0.

1 mmol/ L 的苯并噻吩、 二 苯并噻吩、

4 ,62二甲基二苯并噻吩和苯硫醚) ,混合 液置于恒温振荡器中 ,在120 r/ min、

28 ℃ 条件下 , 振荡培养

48 h (1 个周期) ;

取振荡培养后水相液体

10 mL ,重新接种于

80 mL 无机盐培养液和

10 mL 原油混合液中 ,在120 r/ min、

28 ℃ 条件下 ,振荡培 养48 h ;

如此重复

10 个周期(480 h) [7 ] . 2. 5.

2 菌种的琼脂平板分离和保存 驯化

10 个 周期结束后 ,水相液体以画线分离的方法进行琼脂 平板分离菌种后 ,置于

30 ℃ 恒温培养箱内培养 ,待 琼脂平板培养基长出孤立菌落后 ,将孤立菌落转接 于斜面培养基上 ,置于

4 ℃ 冰箱保存备用. 2. 5.

3 脱硫微生物的确定(脱硫菌株的筛选) 菌 种的活化富集培养 :以无菌操作将保存在斜面培养 基上的菌株接种于

100 mL 富集培养基中 ,置于恒 温振荡器内 ,在120 r/ min、

28 ℃ 的条件下振荡培 养24 h 后使用离心机 ,在6000 r/ min、

15 ℃条件 下离心分离收集菌体 ,制备 0.

5 g/ mL 菌悬液备用 (0.

5 g 湿菌体悬于

1 mL 无机盐培养基中) . 分别取浓度为 2.

72 mmol/ L 和5.

44 mmol/ L 的DB T 正十六烷溶液

10 mL ,与90 mL 0.

5 g/ mL 菌悬液混合 ,置于恒温振荡器内 ,在120 r/ min、

28 ℃ 条件下 ,振荡培养

12 h 和24 h 后 ,测定有机相中 DB T 的含量.测得的 DB T 浓度越小 ,说明微生物 脱硫效果越好 ,即为优势脱硫菌种[8 ] . 2. 5.

4 二苯并噻吩含量的测定 DB T 的定量采 用高效液相色谱法.高效液相色谱仪的使用条件 及方法 :调节高效液相色谱检测波长为