PDF《小菜粉蝶颗粒体 病毒颗粒体 蛋 白基 因的序列测定 及在 大肠》

9 7 %,氨基酸 同源性 为98%.构建了 重组表达载体 p e t .

2 8 a . Gr a n ,I P T G诱导后经 S DS . P AG E检测 ,表 明获得 了颗 粒体蛋 白基因在大肠杆菌 B L

2 1 中的 特 异表达 . 关键词 :小菜粉蝶颗 粒体病毒 ;

颗粒体 蛋白;

同源性 比较 ;

重 组表达载 体 中图分类号 :$

4 3

2 .

1 文献标识码 :A 文 章编号 :1

0 0

3 .

5 1

2 5 (

2 0

0 4 )

0 5 .

0 4

9 3 .

0 5 小菜粉蝶别名菜 白蝶,幼虫俗称菜青虫,属鳞 翅目、粉蝶科 ,为世界性的害虫.我 国分布极为普 遍 .为十字花科 的主要害虫,其中对甘兰类蔬菜危 害 最严重 .小菜粉蝶幼虫被 小菜粉蝶颗粒体病毒 收稿 日期 :2

0 0

4 .

0 2 .

2 7 ,修回日期:2

0 0

4 .

0 4 .

0 3 作者简介:陈可(1978.),男,硕士研究生,从事 昆虫病毒分子生物学研究. 通讯作者:胡远扬 (

1 9

4 9 . ) ,男,湖北武汉籍,教授 ,从事昆虫病毒分子生物学和结构生物学研究.C o r r e s p o n d i n g a n t h o r . T e l :

0 2

7 .

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5 4 维普资讯 http://www.cqvip.com

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4 中国病毒学箜鲞(He f t s r a p a e g r a n u l o s i s v i r u s . P r GV)感染后,表现 体节肿胀 ,体色黄绿,腹面变 白,常倒悬而死.死 虫表皮脆软易破,流出淡黄色乳状液. 自1978年 以来,我 国按国际标准化的建议配制成各种 P r GV 制剂在全 国20多个省、市推广使用 ,防治效果十 分理想.但是 P r GV的分子生物学水平的研究尚属 空白.P r GV 的颗粒体 由包涵体蛋 白、病毒粒子和 包涵体外膜组成.病毒粒子 由包涵体包被 ,一个颗 粒体包含一个病毒粒子【

2 】 .颗粒体的晶格结构由颗 粒体蛋白 ( G r a n u f i n )构成 ,颗粒体蛋白是一种具 有特 定生物学活性的磷酸糖 蛋白.颗粒体不溶于 水 、乙醇、乙醚、二 甲苯和丙酮 ,但能够溶于弱碱 溶液.颗粒体对外界环境的作用有较强的抵抗力, 可以保护病毒粒子,使它保持传染性,对稳定病毒 活性起十分重要的作用【

3 】 . P r GV的颗粒体蛋白由颗 粒体蛋 白基因编码 ,其表达产物分子量为

2 .

9 1

7 8 x

1 0

4 d . 本文首次报导了 P r GV - G r a n u l i n的基 因序列, 包括编码区序列、5 '

端非编码区的启动子序列和

3 '

端非编码区的 P o l y A加尾信号,并构建了一系列表 达载体,对该基因在大肠杆菌中进行克隆和表达. 由于颗粒体蛋白在稳定病毒活性方面的重要作用, 该项工作对于我国在生物防治农林害虫的应用研究 领域具有积极的基础理论和应用价值.同时,该基 因序列的测定对以后 的小菜粉蝶颗粒体病毒基因组 文库的构建以及杆状病毒分子进化的研究也提供 了一定的参考价值 .

1 材料和方法

1 .

1 实验材料 菜青虫及 小菜 粉 蝶颗 粒 体病 毒 、克 隆 载体 P MD1

8 . T V e c t o r 、表达载体 P E T -

2 8 a 、菌株 DH

5 Q 和BL21( DE

3 )为本室保存.限制性内切酶 Hi n d Ⅲ、 D l 以及 T

4 D NA连接酶等购 自晶美公司.

1 .

2 P r GV 的纯 化和 DNA 的提 取 用差异离心法 、蔗糖梯度离心提纯 P r GV , 电 镜观察【

4 】 . 取纯化的 P r GV病毒液, 加入等量的碱解 液(

0 .

1 mo l / L E D T A +

0 .

1 7 mo l / L Na C I +

0 .

1 mo l / L Na

2 C O3 , p H>

1 0 .

8 ) ,

3 7 ℃水浴

3 0 mi n ,溶液 由浑浊变清亮,再 加入