PDF《小菜粉蝶颗粒体 病毒颗粒体 蛋 白基 因的序列测定 及在 大肠》

第19卷 5期2004年

1 O月中国病毒学V1 ROL OGI CA S

1 NI CA

1 9 ( 5) :

4 9

3 ―

4 9

7 Oc t o b e r

2 0

0 4 小菜粉蝶颗粒体病毒颗粒体蛋白基因的序列测定及在大肠 杆菌中的表达 陈可,张珈敏,胡远扬料 ,刘传凤 ( 武 汉大 学生 命科 学 学院 ,湖北武汉

4 3

0 0

7 2 ) Th e Nu c l e o t i d e S e q u e n c e a n d Ex p r e s s i o n i n E.

c o l i o f t h e P/ e r ~ r a p a e Gr a n u l o s i s Vi r u s Gr a n u l i n Ge n e CHEN Ke , ZHANG J i a ― mi n, HU Y u a n ― y a n g , LI U Ch u a n ― f e n g f C o l l e g e o f L i f e S c i e n c e s , Wu h a n U n i v e r s i t y , Wu h a n

4 3

0 0

7 2 , C h i n a ) Ab s t r a c t : A c c o r d i n g t o t h e G r a n u l i n g e n e '

S

1 2 h i g h l y c o n s e r v a t Ne n u c l e o t i d e s( T A T AA GGA A T T T ) u p s t r e a m f r o m t he p r o t e i n i n f l a t i o n c o d o n a n d t he s e q u e n c e o f t he P i e r i s b r a s s i a e g r a n u l o v i r u s( P b GV) g r a n u l i n g e n e , p r i me r s we r e d e s i g n e d t o a mp l i f y t he P i e r i s r a p a e g r a n u l o s i s v i r u s ( P r GV) g r a n u l i n g e n e . Th e p r o d u c t o f P CR a mp l i f i c a t i o n wa s a b o u t

8 5

0 b p . T h e r e s u l t o f s e q u e n c i n g t he s e g m e n t s h o we d t h e c o mp l e t e n u c l e o t i d e s e q u e n c e o f t he s e g me n t wa s

8 5

5 b p . T h e s e g me n t c o n t a i n e d o n e ORF e n c o d i n g P r GV g r a n u l i n g e n e wh i c h s t a r t s a t p o s i t i o n

3 8 ~

4 0 a n d e n d s a t p o s i t i o n

7 7

9 ~

7 8

1 . T h e l e n g t h o f t he OR F i s

7 4

4 b p a n d t he l e n g t h o f p r e d i c t e d p r o t e i n i s

2 4

7 a m i n o a c i d wi t h M W o f a b o u t

2 .

9 1

7 8*

1 0 Da . Co m p a r is o n o f t h e i d e n t i t i e s wi t h o t h e r g r a n u l o s i s v i r u s g r a n u l i n g e n e s h o we d t h e g r a n u l i n g e n e i s h i g h l y c o n s e r v e d i n g r a n u l o s i s v i r u s . T h e P r GV g r a n u l i n g e n e wa s i n s e r t e d i n t o a n e x p r s s i o n v e c t o r , P E T -

2 8 a , t o y i e l d t he r e c o mb i n a n t e x p r e s s i o n p l a s mi d p e t 一28a―Gr a n . Af t e r i n d u c t i o n b y I 门GtheresultofSDS ― P AGE s h o we d t h e e x p r e s s i o n o f P r GV g r a n u l i n i n E. c o l i wa s o b t a in e d. Ke y wo r d s : P i e r i s r a p a e g r a n u l o s i s v i r us ;

G r a n u l i n ( P r GV) ;

C o mp a r i s o n o f t h e i d e n t i t i e s ;

R e c o mb i n a nt e x p r e s s i o n p l a s mi d 摘要 : 根据 颗粒体病毒颗粒体 蛋白( G r a n u l i n ) 基 因在其起始密码子 上游 的12个碱基高度保守序~ l J ( T A T A AG GA A '

V V F ) 以及 大菜粉蝶 颗粒体病毒 ( P b G V)的颗粒体蛋 白基 因的序 列n 设计 引物,P C R扩增得到

8 5

0 b p左 右大小的片段 , 核苷 酸序列测定结果表 明该病毒 的granulin基 因全长 为855bp,起始密 码位于第

3 8 ~

4 0位 碱基 ,终止密码位 于779~781位碱基 , 编码框序列全长 为744;

推测 该基因编码一段 由247个氨基酸组成 的多肽, 分子 质量约 为2.9178*1

0 4 道尔顿.与其它颗粒体病 毒颗粒 体蛋 白基因进行 同源性 比较 ,核苷酸 同源性都在

7 0 %以上 ,氨基 酸同源性 都在

7 5 %以上,最 高的为大菜粉蝶颗粒体病毒 ( P b G V),核苷 酸 同源性为