DOC《附件》

20 普洱市兽药饲料检测所 怒江州动物卫生监督所

20 保山市饲料兽药检测所 迪庆州动物卫生监督所

20 云南省兽药饲料检测所 合计

800 附录2 兽药中非法添加物质检查方法标准 本标准适用于没有已发布的具体的兽药中非法添加物质检查方法标准时使用,本标准执行前应进行耐用性验证,仅限用于建立方法的实验室,其他实验室使用时应重新进行耐用性验证.本标准执行时,应同时进行试剂空白和样品空白与阳性对照试验,检验报告应给出检出限. 第一法 液相色谱―二极管阵列法 色谱条件与系统适用性试验 根据可疑添加物性质,参照药品国家标准、兽药国家标准或者兽药残留检测方法标准的条件自建. 对照品溶液的制备 精密称取目标对照品适量,用甲醇或者其他适宜溶剂配制成每1ml中含对照品10μg至50μg的溶液. 供试品溶液的制备 固体制剂需研细,称取细粉适量(如约相当于一头动物一次用量);

用甲醇或者其他适宜溶剂(超声)定量溶解,滤过,精密量取续滤液定量稀释(稀释倍数要确保不造成仪器污染),即得;

液体制剂量直接精密量取或称取适量,稀释,即得.对于含有高浓度的有机盐和乳化剂等存在强烈的基质效应辅料的产品,应适当增加前处理步骤. 测定法 分别精密吸取上述两种溶液适量注入液相色谱仪,同时记录色谱图与光谱图;

通过与对照品液相色谱图保留时间、光谱图的比对,确定供试品溶液中是否含有可疑添加物. 结果判定 在供试品和对照品浓度接近的情况下,供试品色谱图中如出现与对照品峰保留时间一致的色谱峰(差异不大于±5%);

在一定的波长范围内,两者光谱图无明显差异;

最大吸收波长一致(差异不大于±2nm),判为检出非法添加物. 第二法 液相色谱-高分辨质谱法 液质联用条件 根据可疑添加物性质自建,采用全扫描方式采集一级质谱和二级质谱信息. 对照品溶液的制备 精密称取目标对照品适量,用甲醇或者其他适宜溶剂配制成每1ml中含对照品50ng至500ng的溶液. 供试品溶液的制备 同第一法. 测定法 分别精密吸取上述两种溶液适量注入液相色谱―串联质谱仪,记录液相色谱图及一级质谱图与二级质谱图;

通过与对照品溶液色谱图保留时间、质谱图的对比,确定供试品溶液中是否含有可疑添加物. 结果判定 方法1 供试品色谱图中如出现与对照品峰保留时间一致的色谱峰(保留时间相对偏差不大于2.5%);

供试品质谱图与对照品的应一致(包括分子离子和至少一个碎片离子,质量数差异小于等于5ppm),判为检出非法添加物. 方法2 供试品与对照品分子离子峰的质量数偏差不大于5ppm,且二级质谱图与对照品的二级质谱图一致,判为检出非法添加物. 第三法 液相色谱―串联质谱法 液质联用条件 根据可疑添加物性质自建,采用离子扫描(SRM)或多反应监测(MRM).定性离子对选用兽药残留检测方法标准中的定性离子对或者符合至少4个(非禁用药3个)识别点数的要求. 对照品溶液的制备、供试品溶液的制备 同第二法. 测定法 分别精密吸取上述两种溶液适量注入液相色谱―串联质谱仪,记录特征离子质量色谱图;

通过与对照品溶液色谱图保留时间、离子丰度比的对比,确定供试品溶液中是否含有可疑添加物. 结果判定 供试品色谱图中如出现与对照品峰保留时间一致的色谱峰(差异不大于±2.5%);