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磁纳米・微萃取:为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案

1 生化科技 Enriching Biotechnology 使用说明书 【产品名称】1μm 羧基聚合物磁珠 【产品型号】MPS100/Carboxyl 【目录号】PC11 【产品介绍】 Enriching Beads?-Immunological diagnosis 系列即为聚合物磁珠,它以聚苯乙烯微 球为内核,不仅可以使微球获得较大的浮力而且提供一个均匀一致的尺寸.

表面涂覆高 分子聚合物的涂层使磁性微球具有低非特异性吸附的优势,在免疫诊断领域为降低背景 信号和提高灵敏度奠定了良好的基础.表面修饰丰富的羧基可以与核酸、蛋白、多肽等 生物分子的伯氨基共价偶联形成稳定的酰胺键. 【产品规格】 平均粒径 1?m 固形物浓度 10mg/mL 分散液 H2O 表面配基含量 100~200?mol/g 【产品特点】 ? 超顺磁性粒子,即将其放在磁场中有磁性,磁场撤去后无磁性记忆;

? 磁性分离速度快且分离温和,丰富的配体特异性结合位点;

? 可靠的均匀一致性和低的批内、批间差;

? 低非特异性吸附,单分散,低沉降速率;

【作用对象】适用于含伯氨基的蛋白、多肽、核酸、药物等生物配体. 【有效期】两年(2~8 ℃保存). 【偶联准备】 1. 离心管或者其它符合要求的试剂管(可以透过磁性);

2. 0.01M NaOH 3. 反应缓冲液:100mM MES, pH 5.0;

推荐产品及订货号:Sigma-Aldrich,V900336;

4. 封闭缓冲液:0.1M Tris-HCl, pH7.4;

5. 清洗缓冲液: PBST(含0.1% Tween-20), pH 7.4;

6. 保存液:PBST(含0.01% Tween-20 和0.02% NaN3), pH 7.4;

7. 需要将待偶联的目标蛋白、抗体等生物配体溶解于反应缓冲液中;

8. 偶联活化剂 A (EDC?HCl 溶液):用100mM MES, pH 5.0 缓冲液将 EDC?HCl 溶液配 置为浓度10mg/mL , 现配现用.CAS:25952-53-8;

推荐产品及订货号:磁纳米・微萃取:为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案

2 生化科技 Enriching Biotechnology Sigma-Aldrich,E7750;

9. 偶联活化剂 B1 (EDC?HCl 溶液):用100mM MES, pH 5.0 缓冲液将 EDC?HCl 溶液 配置为浓度 50mg/mL,现配现用. 10. 偶联活化剂 B2 (SNHS 溶液):用100mM MES, pH 5.0 缓冲液将 SNHS 溶液配置为 浓度 50mg/mL, 现配现用. CAS: 106627-54-7;

推荐产品及订货号: Sigma-Aldrich, 56485;

【操作流程:EDC 一步法蛋白、抗体偶联】 1. 将磁珠悬浮液混合均匀,取1mL 磁珠(10mg)加入到 2mL 离心管中,磁性分离去 除上清液;

注:"磁性分离"指将离心管置于外加磁场中,至磁珠吸附完全,约需要 30s. 2. 加入 1mL 反应缓冲液,混合重悬磁珠,磁性分离去除上清液(重复

1 次);

3. 加入 400?L 反应缓冲液,混合重悬磁珠;

4. 加入~500?g 抗体或者蛋白质溶液 (提前溶解于反应缓冲液中) , 室温旋转混合 30min;

5. 加入 100?L 现配偶联试剂 A (EDC.HCl 溶液) , 用反应缓冲液将溶液总体积补至 1mL, 室温旋转混合 1hr,磁性分离去除上清液;

注:建议优化 EDC 用量以获得最佳结果,如EDC:磁珠(w:w)在1:1 和1:100 间. 6. 加入 1mL 封闭缓冲液,混合重悬磁珠,室温旋转混合 2hr,磁性分离去除上清液;

7. 加入 1mL 清洗缓冲液,混合重悬磁珠,室温旋转混合 10-30min,磁性分离去除上清 液(重复 3~5 次);

8. 将上述磁珠分散于保存液(亦可根据需要使用其他保存试剂)中得一定浓度的产品. 【操作流程:EDC/SNHS 两步法蛋白、抗体偶联】 1. 将磁珠悬浮液混合均匀,取1mL 磁珠(10mg)加入到 2mL 离心管中,磁性分离去 除上清液;

2. 加入 1mL 0.01M NaOH,混合均匀,磁性分离去除上清液(重复

1 次);

3. 加入 1mL 去离子水,混合重悬磁珠,磁性分离去除上清液(重复

2 次);

4. 加入 1mL 反应缓冲液,混合重悬磁珠,放置于旋转混合仪上;

5. 立即配制偶联活化剂 B1 和B2;

6. 立即将混合仪上的磁珠液磁性分离去除上清液,并加入 300?L 反应缓冲液重悬磁珠;

7. 立即加入新鲜配制的 100?L 偶联活化剂 B1 和100?L 偶联活化剂 B2,混匀,室温旋 转混合 30min;

注:建议优化偶联活化剂 B1 和B2 的用量以获得最佳结果. 8. 磁性分离去除上清液,立即加入 1mL 反应缓冲液将磁珠重悬,磁性分离去除上清液 (重复

1 次);

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3 生化科技 Enriching Biotechnology 注:该步骤需快速操作,不宜超过 30min. 9. 立即加入 500?L 反应缓冲液将磁珠重悬,加入~500?g 抗体或者蛋白质溶液(提前溶 解于反应缓冲液中),用反应缓冲液将溶液总体积补至 1mL,室温旋转混合 2hr;

10. 磁性分离去除上清液,加入 1mL 封闭缓冲液,混合重悬磁珠,室温旋转混合 1hr,磁 性分离去除上清液;

11. 加入 1mL 清洗缓冲液,混合重悬磁珠,室温旋转混合 10~30min,磁性分离去除上清 液(重复 3~5 次);

12. 将上述磁珠分散于保存液(亦可根据需要使用其他保存试剂)中得一定浓度的产品. 【操作流程:EDC 一步法氨基修饰寡核苷酸偶联】 1. 将磁珠悬浮液混合均匀,取1mL 磁珠悬浮液(10mg)加入到 2mL 离心管中,磁性 分离,小心吸取上清液;

2. 加入 1mL 去离子水,混合重悬磁珠,磁性分离吸取上清液(重复

1 次);

3. 加入 1mL 100mM MES pH5.0 的缓冲液,涡旋均匀 1min,磁性分离,磁性分离吸取 上清液;

4. 加入 300?L 100mM MES pH5.0 的缓冲液,重悬磁珠;

5. 将氨基修饰的寡核苷酸 10~50nmoL 溶于 100?L 100mM MES pH5.0 的缓冲液,然后 加入至上述含有磁珠的缓冲液中,室温旋转混合 30min;

6. 称取 20mg EDC 溶于预冷的 0.2mL 100mM MES pH5.0 的缓冲液,然后取 100?L 迅 速加入上述混合液中,旋涡 30s 后,室温旋转混合

3 小时以上或者过夜;

7. 磁性分离去除上清液,移除上清液,加入 1mL 50mM Tris 0.01% Tween20 pH8.0 清 洗磁珠-寡核苷酸复合物

3 次,每次 30min 进行封闭处理;

8. 加入 1mL PBS pH7.4 清洗上述磁珠-寡核苷酸复合物

3 次;

9. 磁性分离去除上清液,将其保存于 10mM Tris 1mM EDTA pH8.0 中备用;

【注意事项】 1. 偶联过程中不应含有除目标配体外含伯胺基团的物质,如:甘氨酸、BSA、Tris-HCl 等,请注意您的抗体或者蛋白溶液是否含有上述物质;

2. 磁珠使用和保存过程中应避免反复冻融;

3. 不同抗体和蛋白与羧基磁珠结合能力不同, 客户可自行优化加入不同的抗体或者蛋白 质量;

4. 保存液中可根据需要添加 BSA 等物质,或使用其他缓冲组分;

5. 上述 Protocol 可以规模放大或者缩小进行操作;

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4 生化科技 Enriching Biotechnology 6. 蛋白或者抗体偶联完成后需要验证蛋白或者抗体活性,可通过调节偶联过程中 pH、 EDC 加入量、抗体加入量来优化,以改善抗体的偶联载量及活性(不同抗体的最适 偶联 pH 不一致,可从 pH 4.5~6.5 之间优化);

【其它】 该产品可配合多功能磁力架 (订货号 CQT-0011) 、

16 位磁力架 (订货号 CQT-0001) 、 进行手动操作. 英芮诚生化科技(上海)有限公司 地址:上海市国权北路

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电话:021-55809378

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