PDF《REV20180504》

-

1 - REV20180504 仅供研究,不用于临床诊断.

客服热线: 400-7060-959~技术支持

邮箱: tech@4abio.com 公司官网: www.4abio.com Human Adiponectin ELISA 试剂盒 产品编号# CHE0021 (48/96 孔) 适用于人血清、血浆或细胞培养上清液等样本 -

2 - 目录 简介.3 - 检测原理.3 - 试剂盒组分.4 - 储存条件.5 - 其他实验材料

5 - 注意事项.5 - 样本收集处理及保存方法

6 - 试剂准备.6 - 操作步骤.8 - 操作流程图.8 - 操作要点提示

9 - 结果判断.9 - 结果重复性.10 - 灵敏度.10 - 特异性.10 - 参考文献.11 - 该产品由北京四正柏生物科技有限公司研制. 北京经济技术开发区科创六街

88 号院亦庄生物医药园孵化中心

电话: (86) 010-5631

5211 或5631 5212~传真: (86) 010-5631 5212-8813 电邮: info@4abio.com 请根据试剂盒中所附说明书指引进行实验. -

3 - 简介 脂联素,又称 30kD 脂肪细胞因子(Acrp30),adipoQ,脂肪组织特有基因(apM1) 、AdipoQ、28KD 凝胶结 合蛋白(GBP28) ,是由脂肪细胞分泌的一种特异性蛋白,对人体糖,脂代谢平衡有影响,循环脂联素有相对较高 的浓度,约占血浆总蛋白的 0.01%.脂联素含有

244 个氨基酸,由一个羧基端球形结构域、胶原样纤维结构域以及 氨基端信号序列三部分组成.脂联素属于可溶性胶原超家族,与胶原Ⅷ、Χ、补体 C1q 和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)家族具有结构同源性.脂联素可形成三聚体、六聚体和更大分子量的低聚体等不同形式,具 有不同生物活性.脂联素在脂肪细胞分化过程中被诱导产生,由胰岛素刺激其分泌.脂联素的两个受体 AdipoR1 和AdipoR2 编码基因已被克隆出来. 功能上不同于经典的 G 蛋白偶联受体, 预测这两个蛋白有

7 个转膜结构域. 研究发现 AdipoR1 在骨骼肌中表达量高,而AdipoR2 则主要在肝组织中表达. 给非肥胖无糖尿病的正常小鼠注射脂联素,可引起体内胰岛素非依赖性的糖水平降低,这表明脂联素可作为 胰岛素敏感激素,并能调节甘油三酯代谢.在血液中发现只含有 C-末端球状结构的短脂联素(gAdiponectin),研 究人员发现体外重组的短脂联素可以使小鼠肌肉和肝脏的重量下降,和游离脂肪酸过氧化效果一样,而重组全长 脂质素则没有这么好的效果. 短脂联素脂质过氧化中的作用可能是通过对甘油三酯代谢相关蛋白的表达和活性调 控,如CD36, acyl CoA oxidase, AMPK, 和PPARγ. 虽然脂联素在人体内对糖和脂肪代谢的调控还不是很明显,相关机理还在研究.但肥胖和循环脂质素有明确 的负相关关系,随着体重下降,脂联素水平升高.脂联素水平下降和胰岛素抵抗,胰岛素过多相关,Ⅱ型糖尿病 患者循环脂联素水平下降. 胰岛素敏感素, 抗糖尿病药噻唑霉素能提高胰岛素抵抗患者体内的脂联素水平. 另外, 高脂联素水平和Ⅱ型糖尿病风险降低有关. 核磁共振(光谱)分析表明人肌肉细胞内脂肪含量和脂联素水平负相关, 这可能是由于脂联素可诱导脂肪酸过氧化. 脂联素还在抗动脉粥样硬化和抗炎症方面起作用,冠心病患者血浆中脂联素水平下降.另外,在脂联素缺陷 型小鼠中发现动脉被破坏,内膜增厚,加入脂联素后则可抑制这种破坏.脂联素可体外抑制内皮细胞粘附分子的 表达,从而抑制单核细胞的附着.另外,脂联素可负调控粒单系细胞生长和巨噬细胞中 TNF-a 的产生. 人总脂联素免疫检测试剂盒为 4.5 小时固相 ELISA 试剂盒, 用来检测细胞培养上清, 血液和血浆中总 (小分子量, 中分子量和大分子量)人脂联素含量. 检测原理 本实验采用双抗体夹心 ELISA.用抗人 Adiponectin 单克隆抗体预包被酶标板,加入适度稀释的样本和标准品, 其中的 Adiponectin 会与其单抗结合,洗去游离成分;

加入生物素化的抗人 Adiponectin 抗体,抗人 Adiponectin 抗体与结合在单抗上的人 Adiponectin 结合而形成免疫复合物,洗去游离的成分;

加入辣根过氧化物酶标记的亲 合素,生物素与亲合素特异性结合,洗去未结合的酶结合物;

加入显色剂,若反应孔中有 Adiponectin,辣根过 氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色;

加终止液变黄.在450nm 下测 OD 值,Adiponectin 浓度与 OD450 值之间 呈正比,可通过绘制标准曲线计算出标本中 Adiponectin 浓度. -

4 - 检测原理示意图 试剂盒组分 试剂盒组分

96 孔48 孔 配制 1a 标准品

2 支1支按说明书进行稀释 1b 标准品和标本稀释液

4 瓶2瓶即用型 2a 浓缩生物素化抗体

2 支1支按瓶签标识进行稀释 2b 生物素化抗体稀释液

1 瓶1瓶即用型 3a 浓缩酶结合物(避光)

2 支1支按瓶签标识进行稀释 3b 酶结合物稀释液

1 瓶1瓶即用型

4 浓缩洗涤液 20*

1 瓶1瓶按瓶签标识进行稀释 显色剂(避光)

1 瓶1瓶即用型 终止液

1 瓶1瓶即用型 抗体包被板条 8*12 8*6 即用型 封板胶纸

4 张2张即用型 说明书

1 份1份如果您收到试剂盒后发现上表中有任何组分破损或缺失, 请及时联系我司客服 400-7060-959 或tech@4abio.com. 我们将及时为您解决相关问题. -

5 - 储存条件 未启封的试剂盒 4℃保存,请于保质期内使用. 已启封或重新溶解的试剂1b 标准品和标本稀释液 可以整盒放入 4℃储存

1 个月. 2a 浓缩生物素化抗体和 3a 浓缩酶结合物需现用现 配. 2a 浓缩生物素化抗体(100*) 2b 生物素化抗体稀释液 3a 浓缩酶结合物(避光 100*) 3b 酶结合物稀释液

4 浓缩洗涤液 20* 显色剂(避光) 终止液 4℃或常温保存 标准品 重溶后分装,-20℃存放一个月,避免反复冻融.稀释 后的标准品使用后应丢弃,不得重复使用. 抗体包被板条 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封干燥 4℃保存. 以上储存条件均要求在试剂盒保质期内. 其他实验材料 (不提供,但可协助购买) : 1. 酶标仪(450nm) 2. 高精度可调移液器及吸头: 0.5-10, 2-20, 20-200, 200-1000μl;

一次检测样品较多时,最好用多通道移液器. 3. 自动洗板机或洗瓶 4. 37℃温箱 5. 双蒸水或去离子水 6. 坐标纸 7. 量筒 注意事项 1. 试剂盒保存在2-8℃,除复溶后的标准品,其它成分不可冷冻. 2. 浓缩生物素化抗体(2a)、 浓缩酶结合物(3a)装量极少, 运输中颠簸和可能的倒置会使液体沾到管壁或瓶盖. 使 用前请离心处理以使附着于管壁或瓶盖的液体沉积到管底. 3. 为避免交叉污染请使用一次性吸头. 4. 终止液和显色剂具腐蚀性,避免皮肤及粘膜直接接触,一旦接触到这些液体,请尽快用大量水冲洗. 5. 使用干净的塑料容器配制洗涤液,使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品. -

6 - 6. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水. 7. 不要用其它来源的试剂混合或替代该产品的组分,不同批号的试剂盒组份不能混用,请在有效日期内使用本 产品. 8. 在试验中标准品和样本检测时建议作双复孔或三复孔,加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应孔孵育的时 间一样. 9. 充分混匀对反应结果尤为重要,最好使用微量振荡器(使用最低频率进行振荡). 10. 避免操作过程中酶标板干燥,干燥会使酶标板上生物成分迅速失活,影响实验结果. 11. 适当的稀释样品, 使样品值落在标准曲线范围内, 根据待测因子含量高、 中、 低的不同, 建议采用1:100, 1:10, 1:2稀释样品.如果样品OD值高于最高标准,适当增加稀释度并重复检测. 12. 标准品稀释液、操作人、移液方式、洗涤方法、孵育时间及温度、试剂盒批次的不同均可能会导致结果的差 异. 13. 此法可有效的消除可溶性受体、结合蛋白以及生物样品中的其他因素的干扰. 样........