PDF《在大肠杆菌中分别表达汉滩病毒囊膜糖蛋白G1和G2》

弓一f第1

2 卷第4 期1997年

1 2月中国病毒学V【 RoLoG【 C A S【 N【 C A 弓7Vo

1 .

1 2 No .

4 De c .

1 99

7 在大肠杆 菌中分别表达 汉滩病毒囊膜糖蛋 白G1 和G2黄长 形 杨为松t , 杭长寿 白雪帆 李 光玉 一 ― 一/(第四军 医大 孥唐都 医院传 染科, 西安

7 1

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3 8 ) 帽 甜医 学科学黼章 学矸宪耽北州'

7・王提要利用PCR方法扩 增 了汉 濉病毒

7 6―1

1 8株囊膜 糖蛋白G1和G2的编 码 区基 因, 并将 P C R产物 克隆到 T一载体 中, 用 限制 性 内切酶 将G1 和G2的编 码 区基 因切 下.并克隆 到表达载体 p B V

2 2 0中掏建 G 1和G2的表达 质粒 .诱 导表 达后在 S DS ―P AG E凝胶中未 见 表达 产物带 , 表达 的G1 和G2能与 部分 抗Gl 和G2的单克隆抗体发生 反应 . 但用 We s t e x n~b l o t 方法不 能检测到表 达产物 .用表达 的G1 和G2免疫小白 鼠能刺激小 白鼠产 生特异性抗汉滩 病毒的抗体 , 同接免疫荧 光抗 体的滴度可 分别达到

1 :

1 6 0和1:320.关键词 . 坚苎基垂・囊膜糖蛋白 G

2 ・ 塞兰六汉滩病毒囊膜糖蛋 白G1和G2由M片段基因编码, M 片段基因只有一个大的开放读框. 编码一种大的前体蛋 白, 在细胞 内质 网内大的前 体糖蛋 白被加工成 G 1和G2两个小的糖蛋 白.糖蛋 白G1和G2的功能与该蛋 白的空间结构和糖基化关系密切.为 了探讨非糖基化的 非真核细 胞加工的 G1和G2蛋 白的功能, 本研究在大肠杆菌 中表达 了G1和G2,为了更好地 探讨独立的 G 1和G2的免疫特性 , 利用 P C R方法 . 分别将 G1和G2的编码 区基 因从含汉滩病 毒M片段基因 e DN A的质粒 中扩增 出来, 克隆到大肠 杆菌表达 质粒 p B V2

2 0中, 构建分别表 达G1和G2的两个表达质粒 . 并在大肠杆菌中进行表达 . 材料和方法 l 材料

1 .

1 质粒和 宿主 菌 质粒 M5 6由美 国Schraaljohn博士 惠赠 , 含76―1

1 8株病毒 M 基因 全片段 e D NA;

汉 滩病 毒 核蛋 白表达 质粒 p B VS

2 2由本室掏建 … ;

表达载 体质粒 p B V2

2 0 . 质粒 p G E M 一5 Z F ( +) 和宿主菌 T G1由本室保存 .

1 .

2 单克 隆抗体 和恢复期 肾综合 征出血热病人 血清 抗G1单抗 B一1

0 0 ,

2 D

5 .

3 1

3 5 . 抗G2单抗

8 E

1 0和抗糖 蛋白单抗 ( 抗G1或 G 2未定 )

3 G

1 . J D

0 4由病 毒所 杭长 寿教 授惠 赠;

抗核蛋 白单抗 A

3 5购 自中国预 防医学 科学 院病毒所 ;

病 人恢复期血 清由本室收集 .

1 3 荧光抗 体 和酶标抗体 '

异硫氢 酸荧光 紊标记的羊 抗鼠IgG抗体购 自北京生物 制品研究所 ;

辣 报过 氧化物酶 标记 的羊抗 鼠1gG和 羊抗人 I g G抗体购 自Sigma公司;

辣报过氧化物酶标记 的A35由本 室制 备. 收穑 日期 :

1 9

9 6 ―1 2-0

6 , 回日期 :

1 9

9 7 ―0 3―2

4 ¨ 其他作者 : 第四军 医大学唐都 医院传染科 孙 永涛 张文彬 周永兴 . = 面 蛋一 糖一塑维普资讯 http://www.cqvip.com

3 1

4 中国病毒学第12卷1.4汉滩病 毒抗原 片汉滩病 毒(76―1

1 8株) 抗原 片 由本室 白行 制备.

1 5 实验动物 昆明小 鼠购 自于本校 实验 动物 中心, 试验 前剪 尾取血, 用间接荧光法 检测是否有抗汉滩病毒抗 体, 所有试 验小 鼠均 为阴性 .

1 6 试剂 P C R试剂盘 昀白Prome g a 公司 ;

限制性 内切酶 、 T

4 D N A连接酶购 白Be.hringerMa n n h e i m、 中国 医 学科学 院基础 所及华美 生物工程公 司;