编辑: 雨林姑娘 | 2019-07-07 |
5 个梯度,且待测 dsDNA 样品的浓度须介于稀释标准品的浓度区间范围内,以保证检测结果的准确性. 1.4 向96 孔酶标板中加入梯度浓度的 dsDNA 标准品或待测的 dsDNA 样品,每孔
10 ?l,并分别设置 1-2 个复孔,加入后用移液枪轻轻地吹打混匀. 1.5 将酶标板至于室温环境下避光孵育
2 分钟. 核酸定量检测试剂盒使用说明书
3 1.6 使用荧光酶标仪检测荧光信号值,选择合适的检测波段:激发波长(Ex)设置为
485 nm,发射波长(Em)设置为
530 nm. 1.7 测得的梯度浓度 dsDNA 标准品的荧光信号值分别对应其浓度,绘制标准曲线;
将 测得的未知浓度 dsDNA 样品的荧光信号值代入标准曲线中,可计算出 dsDNA 样品的 浓度. 2. 使用 Qubit?荧光仪进行 dsDNA 定量检测分析 注意:①为简便起见,以下操作说明中以
10 μl 的dsDNA 样品为例,但是实际应用中应根据 dsDNA 样品的浓度选择合适的体积(一般情况下待测的 dsDNA 样品体积范围为 1~20 μl),然后 调整 iQuant? NGS-BR reagent 的体积,使整个检测体系的总量为
200 ?l. ②如待测样品浓度高于
1000 ng/μl,请进一步稀释样品后再进行检测,否则会影响结果的准 确性. 2.1 在使用前,将试剂盒中的各组份恢复至室温. 2.2 向分析管中分别加入新鲜配制的检测工作液,每管
190 ?l. 注意:仅可使用 0.5 ml PCR 的薄壁分析管. 2.3 向分析管中加入 iQuant? NGS-BR dsDNA Standard #1 (组分 B)、iQuant? NGS-BR dsDNA Standard #2 (组分 C) 、或待测的 dsDNA 样本,每管
10 ?l,涡旋震 荡2-3 秒使充分混匀.请注意正确标记 dsDNA 标准品和待测样品的分析管. 2.6 将分析管至于室温环境下避光孵育
2 分钟. 2.7 按照 Qubit?荧光仪的操作说明,选择 dsDNA Broad Range 检测程序测定荧光信 号值. 实验案例 图2:使用 Qubit?荧光仪对 Lambda DNA 进行定量的结果. 核酸定量检测试剂盒使用说明书
4 附录 污染物对 iQuant? NGS-BR dsDNA 定量检测试剂盒检测结果的影响 污染物 试剂盒终浓度
10 ?l 样品中的浓度 检测结果 Proteins 牛血清白蛋白
50 ?g/ml
1 mg/ml OK Salts 氯化钠
10 mM
200 mM OK 氯化镁
2 mM
40 mM OK 醋酸钠
10 mM
200 mM OK 醋酸铵
10 mM
200 mM OK Organic Solvents 乙醇 0.5% 10% OK 氯仿 0.1% 2% OK 苯酚 0.1% 2% OK Detergents 十二烷基硫酸钠 0.01% 0.2% OK Triton X-100 0.005% 0.1% OK Other Compounds dNTPs
100 ?M
2 mM OK RNA 1X 1X OK 相关产品 产品货号 产品名称 包装规格 N020-1 iQuant? NGS-HS dsDNA Assay Kit
250 assays N020-2 iQuant? NGS-HS dsDNA Assay Kit
500 assays N022 iQuant? Assay Tubes
500 tubes 核酸定量检测试剂盒使用说明书
5 使用许可与质量保证 使用限制 以下条款适用于 iQuant? NGS-BR dsDNA Assay Kit 产品.若您不能接受这些条款, 请在
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