PDF《产品说明书》

4、用20 μg/mL 蛋白酶 K( in PBS)促渗,处理组织,37℃孵育30 min.根据组织类型,蛋白酶 K 的孵育温度和时间可 相应的变化.

5、用PBS 清洗两次.

3、反应混合液准备 3.1 用去离子水将 YF dye dUTP 稀释成

10 ? M. 3.2 每个样品准备

100 ? L TUNEL 平衡缓冲液:

20 μL 5*TdT 反应缓冲液

20 μL

25 mM CoCl2

60 μL dH2O 3.3 每个样品准备

50 ? LTUNEL 反应混合液,如下表所示: 组分 体积 最终浓度 5*TdT reaction buffer

10 ? L 1*

25 mM CoCl2

10 ? L

5 mM

100 μM dATP 2.5 ? L

5 ? M

10 μM YF dye dUTP 2.5 ? L 0.5 ? M 12.5 U/μL TdT

1 ? L 12.5 U/reaction dH2O

24 ? L 总体积

50 ? L

4、TUNEL 染色 4.1 向样品中加入

100 ? L 平衡缓冲液,室温下孵育

5 min. 注意: 对于贴壁细胞或者组织切片, 用石蜡盖玻片覆盖样品, 使缓冲液均匀覆盖样品. 4.2 去除平衡缓冲液,另外加入

50 ? L 反应缓冲液 注意:对于贴壁细胞或者组织切片,用盖玻片覆盖样品,使 缓冲液均匀覆盖组织. 4.3 37℃避光孵育

60 min.组织切片需 37℃避光孵育

2 h. 注意:①对于细胞或组织切片,孵育需在潮湿环境下进行. ②对于悬浮细胞, 孵育需在摇床上进行, 或者在孵育的过程 中,每隔

15 min,轻轻的摇晃一下反应液. 4.4 用含有 0.1% Triton X-100,

5 mg/mL BSA 的PBS 溶液 清洗样品三次,每次

5 min. US EVERBRIGHT? INC. 技术支持: 0512-88965152 www.useverbright.com 4.5 如果需要,可进行样品复染.采用荧光显微镜或者流式 细胞仪观察.TUNEL 标记的细胞的细胞核显示出明亮的荧 光.不含 TdT 酶的对照组可观察到细胞未被标记上荧光. 相关产品: 货号 名称 CD0048-5nmole Cy3-dUTP CD0048-25nmole BD0050-50ug Biotin X-dUTP T6039-20T YF?555 TUNEL Assay Apoptosis Detection Kit(橙红色荧光) T6039-50T T6014-20T YF?594 TUNEL Assay Apoptosis Detection Kit(红色荧光) T6014-50T S2001-0.5mL Super GelRed? 10,000*in water S2002-0.5mL Super GelRed?, 10,000*in DMSO S2003-0.5mL Super GelGreen? 10,000*in water S2004-0.5mL Super GelGreen?, 10,000*in DMSO