PDF《,朱彩珠 2 ,葛艳1》

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7 道 长度 一致 f

5 】 .该序 列经 低融 点Agarose凝胶 纯化 , 与 T载体 连接 ,得到 重组 p T 一3AB C质粒 , B a mH I 、 Hi n d I I I 双酶切 鉴 定确 认重 组载 体 中包含

3 a b c片段 ( 图1).低 融点Ag a r o s e凝胶 纯化3abc和 p E T

3 2 a B a mH I 、Hi n d I I I 双酶切 片段 ,连接 后转 化宿 主菌 B L

2 1 ( DE

3 ) p l y s S , 获得的重组菌命名为BLpS3AB C.提取 质粒 酶切 鉴定(图2),并进行 测序,对测序结果进行计算机分析,表 明重组

3 a b c 序 列与 文献报 道序列符合 率大 于90%,插 入位 置 阅读框 正确 . b p

2 5

0 0

2 0

0 0

1 0

0 0

2 5

0 图1重组 p T 一3AB C质粒 的双 酶切鉴定 F i g .

1 I d e n t i f ic a t i o n o f r e c o mb i n a n t p T・

3 ABC

1 ,T一3ABC d i g e s t e d b y Ba mH I a n d Hi n d HI ;

2 ,p T-

3 ABC d i g e s t e d [ b y Ba mH I a n d , l d HI ;

3 ,

3 ABC P CR p r o d u c t ;

4 , T- v e c t o r ;

5 , T- v e c t o r ;

6 , DNA ma r k e r DL2

0 0

0 ;

7 . DNA ma r k e r DL1

5 0

0 0 . A b p

2 0

0 0

1 0

0 0

5 0 o 图2重组 p E T

3 A B C质粒 的双酶切鉴定 F i g .

2 I d e n t i f i c a t i o n o f r e c o mb i n e d p E T3 AB C

1 , p E T3 ABC d i g e s t e d b y B a mH I a n d H/ n d H I ;

2 , DNA ma r k e r DL2

0 0

0 . 重组 菌诱导表 达产 物经SDS ― P AG E 电泳和 蛋 白免疫 印迹 反 应确 定 ,表达 的3AB C融合 蛋 白命名 为pET3ABC,分子 量约 为56kDa , We s t e r n B l o t t i n g 检测 , 表达蛋 白能与 F MD........