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1 pg-5 μg 0.1 pg-500 ng 0.01 pg-500 ng 引物 Oligo(dT)18 引物 和随机引物 或 基因特异性引物 0.25 μl(25 pmol) 0.25 μl(25 pmol) 2-20 pmol

10 mM dNTP 混合物

1 μl 无核酸酶的水 至15 μl 2. 可选. 如果模板 RNA 富含 GC 或者已知含有二级结构,轻轻混匀并短暂离心,65℃孵育

5 分钟.冰上冷却,再次短暂离心后置于冰上. 3. 按标明的顺序加入以下成分: 5*RT 缓冲液

4 μl Maxima H Minus Enzyme Mix

1 μl 总体积

20 μl 轻轻混匀并短暂离心. 4. 25℃孵育

10 分钟,之后再 50℃孵育

15 分钟. 5. 85℃加热

5 分钟以终止反应. 注:若RNA 模板量大于

1 μg,则延长反应时间至

30 分钟.若RNA 模板富含 GC 或含 有大量的二级结构,可将反应温度提高至 65℃. 该反转录反应产物能够直接用于 qPCR, 或者在-20℃条件下存放一周. 如需长时........