PDF《主要食用菌中转基因成分定性 犘犆犚 检测方法》

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犁荦/2

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0 8 主要食用菌中转基因成分定性 壹觳夥椒 樽 镒() 樽遄 镒遄樽 踝20080429发布

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1 1

0 1实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布www.

grainnet.cn 前言本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口. 本标准起草单位: 中华人民共和国福建出入境检验检疫局. 本标准主要起草人: 陈文炳、 邵碧英、 江树勋、 李寿崧、 朱晓南、 郭立新、 杨婕. 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准. Ⅰ 犁荦/2

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8 www.grainnet.cn 主要食用菌中转基因成分定性 壹觳夥椒

1 范围 本标准规定了主要食用菌中转基因成分检验的抽样、 制样、 定性 P C R 检测方法. 本标准适用于对主要食用菌( 杏鲍菇、 红菇、 姬松茸、 香菇、 草菇、 牛肝菌、 鸡腿菇、 金针菇、 双孢蘑菇、 猪肚菇、 凤尾菇、 小平菇、 秀珍菇、 猴头菇、 金顶侧耳、 茶树菇、 竹荪、 黑木耳、 白木耳等) 中转基因成分的 检测.

2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件, 其随后所有 的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准, 然而, 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件, 其最新版本适用于本标准. G B / T6

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2 分析实验室用水规格和实验方法( G B / T6

6 8 2―1

9 9 2, n e qI S O3

6 9 6:

1 9

8 7 ) S N / T1

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4 植物及其加工产品中转基因成分实时荧光 P C R 定性检验方法

3 缩略语 下列缩略语适用于本标准. 3.

1 荦侠缱樽 遄 遄罄丛从诟┡└司碾僦詈铣擅富. 3.

2 樽樽 嶙 遄 遄罄丛从诟司 遄蟛荻§⒁阴Ｗ泼富. 3.

3 绽绂陋镒 遄濡陋财咸侨┧崦富( 作为植物基因表达的报告基因) . 3.

4 荦寓 状樽椽3′嶙 遄謇醋源蟪Ω司 K

1 2菌株的新霉素

3 ′ 磷酸转移酶Ⅱ基因. 3.

5 1

8 犁能帘嗦1

8 S r R NA( 核糖体) 的DNA.

4 原理 样品经过提取 D NA 后, 针对转基因食用菌所导入的常见外源基因的基因序列设计引物, 通过 P C R 技术, 对外源基因的 D NA 片段进行特异性扩增, 根据实验结果, 判定该食用菌样品是否含有外源基因 成分.

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5 试剂和材料 除另有规定外, 所使用的试剂为分析纯或生化试剂, 水为按照 G B / T6

6 8 2规定的一级水. 5.

1 2%C T A B缓冲液:

2 0g / LC TA B, 0. 1m o l / LT r i s HC l ( p H 8.

0 ) ,

2 0mm o l / LE D T A( p H 8.

0 ) . 5.

2 T r i s饱和酚或水饱和酚. 5.

3 三氯甲烷. 5.

4 异戊醇. 5.

5 异丙醇. 5.

6 无水乙醇. 5.

7 7 0%乙醇. 5.

8 T E溶液(

1 0mm o l / LT r i s , 1mm o l / LE D TA, p H 8.

0 ) . 5.

9 R n a s eA(

1 0μ g / m L) . 5.

1 0 蛋白酶 K(

2 0m g / m L) . 5.

1 1 琼脂糖: 电泳纯. 5.

1 2 三羟甲基氨基甲烷( T r i s ) . 5.

1 3 氯化钠溶液( 1. 0m o l / L) . 5.

1 4 E D TA( p H 8.

0 ) : 乙二胺四乙酸. 5.

1 5

1 0*P C R 缓冲液( 含2 5mm o l / L 氯化镁) . 5.

1 6 d NT P s溶液: d AT P, d C T P, d G T P, d T T P各2. 5mm o l / L. 5.

1 7 D NA 聚合酶. 5.

1 8 引物: 检测转基因食用菌内、 外源基因的引物序列及相关信息见表1. 表1 乙镉 也 基因名称 基因来源 引物序列扩增长 度/ b p 退火温 度/℃ 提示