PDF《ISPM 27 号标准 限定有害生物诊断规程》

本诊断规程于

2016 年8月由标准委代表植检委通过.

本附件是 ISPM

27 号标准规定的一部分. 国际植物保护公约 DP 13-1 ISPM

27 号标准 限定有害生物诊断规程 DP 13:梨火疫病菌(Erwinia amylovora)

2016 年通过;

2018 年出台 目录1. 有害生物信息

3 2. 分类信息

3 3. 检测.4 3.1 显症植物的检测.4 3.1.1 症状

4 3.1.2 取样与样品制备.5 3.1.3 分离

5 3.1.3.1 从显症样品中分离

5 3.1.3.2 富集分离.7 3.1.4 血清学检测

7 3.1.4.1 富集 - DASI-ELISA

7 3.1.4.2 直接组织印迹-ELISA

8 3.1.4.3 免疫荧光.8 3.1.4.4 侧向层析免疫检测

9 3.1.5 分子检测.9 3.1.5.1 分子检测的对照.9 3.1.5.2 DNA 提取

10 3.1.5.3 通过 PCR 进行 DNA 扩增

11 3.1.5.4 关于 PCR 的一般考虑

13 3.1.5.5 实时 PCR

13 3.1.5.6 PCR 结果的解释

15 3.1.5.7 环介导等温扩增.15 3.2 对无症状植物的检测

16 3.2.1 取样和样品制备.16 3.2.2 筛选试验.17 4. 鉴定.17 4.1 营养学与酶学鉴定

18 DP

13 限定有害生物诊断规程 DP 13-2 国际植物保护公约 4.1.1 生物化学特征

19 4.1.1.1 营养学与酶学图谱

19 4.1.1.2 自动化鉴定

20 4.1.1.3 脂肪酸分析

20 4.2 血清学鉴定

20 4.2.1 凝集反应.20 4.2.2 免疫荧光.20 4.2.3 ELISA.20 4.2.4 侧向层析免疫

21 4.3 分子鉴定.21 4.3.1 PCR

21 4.3.2 巨限和脉冲场凝胶电泳.21 4.4 致病性技术

21 5. 记录.22 6. 获取进一步信息的联络点.22 7. 致谢.23 8. 参考文献

23 9. 图27 限定有害生物诊断规程 DP

13 国际植物保护公约 DP 13-3 1. 有害生物信息 解淀粉欧文氏菌(Erwinia amylovora)是火疫病的致病因子,可危害蔷薇科 (Rosaceae)苹果亚科(Maloideae)(绣线菊亚科(Spiraeoideae))多数种类的 植物.它是第一个被报道的细菌类植物病原物(Burrill, 1883).梨火疫病菌被认 为最早在北美洲发生,北美洲以外则是

1920 年首次在新西兰发现.梨火疫病

1957 年在英国报道,此后在欧洲多数地区栽培感病寄主的均欧洲多数地区均有发现.梨 火疫病菌目前在

40 多个国家发生.在南美洲和多数非洲、亚洲国家(地中海周边 国家除外)尚无发生记录,澳大利亚曾有一例报道,但随后已被根除(van der Zwet, 2004).梨火疫病对所有这些国家仁果类产业构成了很大威胁(Bonn 和van der Zwet, 2000).有关地理分布的详细信息可获自欧洲与地中海植物保护组织 (EPPO)的植物检疫数据检索系统(Plant Quarantine Data Retrieval System ) (EPPO,n.d.). 从经济学和流行学角度而言,最重要的寄主植物包含木瓜属(Chaenomeles)、 兆邮(Cotoneaster )、山楂属(Crataegus )、XK属(Cydonia )、枇杷属 (Eriobotrya)、苹果属(Malus)、欧楂属(Mespilus)、火棘属(Pyracantha)、 梨属(Pyrus)、花楸属(Sorbus)和红果树属(Stranvaesia)(Bradbury, 1986). 美国从悬钩子属植物(Rubus sp.)中分离到的梨火疫病菌菌株和从其他寄主上分离 到的菌株明显不同(Starr 等,1951;

Powney 等,2011b). 梨火疫病在很多国家可能是对梨(Pyrus communis)和苹果(Malus domestica) 危害最重的细菌性病害.病害不定时流行取决于很多因素,包含有利的环境条件、 果园中有足够高的侵染源水平,以及寄主的感病性.该病害易于随鸟类、昆虫和风 雨传播(Thomson,2000).火疫病症状随着寄主植物的季节性生长发育进程而发 展.春季病害随着溃疡斑中越冬细菌产生初侵染源而开始发生(Thomson,2000) 并引起花器侵染,入夏后继续侵染嫩梢和果实,最后在冬季寄主休眠期形成溃疡斑 (van der Zwet 和Beer,1995;