PDF《关键词人白介素_ 1》

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第1

3 卷第2 期1998年 6月中国病毒学VIROI .

OGI CA SI NI CA V0l

1 3 NO

2 J u n .

1 9

9 8 人 白细胞介素一 l

8 基 因的克隆及其在大肠杆 菌 中的表达 徐东 刚 陈淑芬 圭 整望 V 孟宗达z 逯好英 崔泽朱会 宾孟文华 ( 军事医学科学院基础 医学 研究所. 北京100850(河北省卫生防疫 站.傈定071000)372摘要利用反 转录PCR( R T P C R) 法从 人肝 组织 中 分离人 白舟 素18(hiL-18)基因.克隆 到Tvectoreasy载体中 ,经酶切初 步鉴 定后进 行DNA序列分 析, 结 果表 明 与文献 报道 完全一致. 以pBV2

2 0为表达载 体, 在大 肠杆菌 中高 教表 达了hlI.18基 因. 重组蛋白占 苗体 总蛋白的

2 7

2 %. 为进一步研究 其生物活性奠 定了重要 基础 . 关键词人 白介素_18,:垒生,重要・细包拿,孑,白细 胞介素18(IL一18)即7干 扰素诱 导 因子 ( I GI F)

0 J , 是最近发现的一 种新细胞因子 , 其 生物活性与 I L 一12相似.它具有促进 T、 B淋巴细胞的分化增殖 、 激活 NK细胞, 以及诱导产生 I F N I L 一 2和 GM― C S F的作 用l2J.研 究表 明II,18作 为一 种 多效性 细胞因子 , 是 以一 种 免疫 调节 因子 起作用.由于 I I 一18在传 染病 和肿瘤免疫 治疗 上具有广阔的应 用前景,已成 为 医学 和免疫学的研 究热 点.我们从人胎肝 细胞中分离 了人 I L -

1 8基因, 序列分析结果表明与文献 报道 完全 一致 , 并 在大 肠杆 菌 中高 效 表达 了hII,l8基 因. 材料和方法

1 工具 酶BamHI , E c o R I 限制性 内切酶 . T

4 D NA连接酶和 c DN A合 成试剂盘均购 自Prome E a 公司.

2 质粒和菌攘 质粒 p G E M― T( e a s y ) 购白Prome g a 公司 质粒 p B V

2 2

0 , 大肠杆菌 E c o i l J M1

0 9 , D H

5 由军 事 医学科 学院分子遗传 室保存.

3 引物台成 参考 Us h i o S等_2报道的 h l I .

1 8 基 因序列, 设 计合 成引物. 为便于克 隆与表达在 引物 的两 端 分别 加入了EeoRI、 B a mH I酶切位点和起始密码子ATG. 引物序列为FI:GGA A T T C A T G TAC TTTGGC AAG CTTG, RI: CGGGATCC CTAGTC兀CG TTTTGAAC

4 e D NA合成与 R T . P C R R N A提取 : 胎 肝组 织采 自水囊 引产的胎儿, 无 菌手续 剖取 肝标本 .用 异硫 氰酸 胍一步法 . 从肝组 织 中提取 总RNA .e D NA台 成选 用美 国Prome g a公司 产cDNA台 成试 剂盒 ( R e v e r s e Tr a n ― s c r i p t i o n S y s t e m, P C R R e l a t e d . A

3 5

0 0 , P r o m e g a C o r p o r a t i o n ) . 使用Ol i g o ( d T) 引物. 基 因扩增 采用 R T - P C R方法,

4 2℃反转录

4 5r ai n ;

P C R反应条件 为:

9 4℃4

0 s

5 0℃4

0 s 、

7 2℃

6 0 s , 进行30个 循环. s D NA序判分析 用ABI310自动诩 序仪及 配套试剂 . 由解放军

3 0 2医院基 因工程室进行垒序列分析 .

6 重组表达 质粒 的构 建RT― P C R产物直 接 克隆到 p G E M― T( e a s y ) 裁体中构建 p GE M― T― I I

1 8重 组质粒 . 特 收稿 日期 J

9 9 7―1 0―2

0 . 修 回日期

1 9

9 7 一J 2―2

6 本课题受 河北省科委 资助 维普资讯 http://www.cqvip.com 第 2期 徐东 刚等 : 人白细胞 介素 一1 8基因的 克隆 及其 在大肠杆菌 中的表 达 其与 p B V

2 2 0分 别用 F ~ - o R I 和BamH I 消化 , 玻璃奶 法 回收 , 4℃ 下过 夜进行 连接 反应 . 连 接产物 转化 D H S c * 感 受态细胞.

7 重组蛋白的诱导表达 将带有重组质粒的D h