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技术支持: 0512-88965152 www.useverbright.com 产品说明书产品名称:PicoGreen 产品货号:P2023 产品规格:1 mL 储存条件 本产品 4℃避光保存,推荐条件下至少可以储存

6 个月. 产品参数 Ex/Em: 480/520 nm(结合 dsDNA) 产品介绍 PicoGreen是荧光检测dsDNA并进行定量的一种产品, 这种方法非常灵敏.常用于分子生物学技术:cDNA 文库 的构建、亚克隆的DNA片段纯化及应用,比如进行DNA定量、产物扩增和引物的进一步检测.常规的DNA含量的检 测方法是在260nm处测其吸光值.这种方法的主要缺点是核 苷酸、单链核酸和蛋白质对信号的影响很大, 并且还会受到 核酸制备过程中污染物的干扰,无法区分DNA和RNA,而 且这种方法不灵敏(5 μg/mL dsDNA溶液A260 = 0.1). PicoGreen定量检测方法简单、 方便, 成为生物制品残留DNA 检测的标准. PicoGreen只有与dsDNA结合后才发出荧光,并且所发 荧光强度与DNA浓度成正比. PicoGreen可以检测出 25pg/mL - 1000ng/mL范围内的dsDNA,且线性较好(R2 >0.99). 使用方法 试剂制备 PicoGreen dsDNA定量试剂是以1 mL的浓缩液形式保 存在无水的DMSO(二甲基亚砜)中.实验时,配制操作 溶液:2*PicoGreen试剂,将浓缩液用1* TE(10 mM Tris-HCl,1 mM EDTA,pH7.5)按1:200的比例稀释.对 于终体积为200 μL的检测体系,如果要准备足够的操作溶 液测定20个样品,可在2 mL 1*TE中加入10 μL PicoGreen dsDNA定量试剂;

对应终体积为2mL的检测体系,检测20 个样品,则需要在20 mL 1*TE中加入100 μL PicoGreen dsDNA定量试剂.由于试剂容易吸附到玻璃表面,要在塑 料容器中配制.PicoGreen试剂见光易降解,因此要注意避 光保存. 溶液最好在配制好数小时内使用,以保证最佳结果. 实验方法 1. 标准品工作液的配制: Sigama小牛胸腺嘧啶DNA干粉1 mg(Tris,Nacl等浓度 已成标准体系),加入1 mL双蒸水,配制成1 mg/mL的标准 液. 2. 染料工作液的配置:

5 μL PicoGreen加入1 mL TE (注意: 用1* TE将PicoGreen 稀释200倍,现用现配,注意避光). 3. 标准液稀释: (1) 母液稀释: 取10 μL (1 mg/mL) 标准液加入到990μL TE 溶液中,稀释成10 μg/mL,取10 μL(10 μg/mL)标准液加 入到990 μL TE溶液中,稀释成100 ng/mL. (2)倍比稀释:取800 μL(100 ng/mL)的标准液加入到

200 μL TE溶液中,浓度为80 ng/mL,取500 μL(80 ng/mL) 的标准液加入到500 μL TE溶液中,稀释到40 ng/mL;

依次 倍比稀释,配成20 ng/ml、10 ng/ml、5.0 ng/ml、2.5 ng/ml. 4. 标准曲线的制备:倍比稀释后的各梯度标准品溶液和染 料工作液各取100 μL混匀,避光室温放置5 min.使用FB-15 型便携式荧光仪检测样品的荧光值: 将混合后的溶液加入微 US EVERBRIGHT? INC. 技术支持: 0512-88965152 www.useverbright.com 量比色皿,注意不要在样品中引入气泡, 轻弹微量检测皿的 外部,可以驱散气泡.以1* TE缓冲液为空白对照,测定样 品和空白对照的荧光值;

或者直接用96孔板进行荧光检测, 激发波长480 nm,发射波长520 nm,用标准品溶液的浓度 (ng/ml)对应的荧光强度作直线回归,制备标准曲线. 5) 测量待测样品的荧光值.根据制作的DNA浓度的标准曲 线,计算待测样品浓度. 注意事项 1. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧 光淬灭. 2. PicoGreen工作液最好现配现用,以保证最佳结果. 3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作. 相关产品 货号 产品名称 W2010-200T WonderBlueTM Broad Range dsDNA Quantitation Kit W2010-1000T W2011-200T WonderBlueTM High Sensitivity dsDNA Quantitation Kit W2011-1000T P2024-2000T X-Green dsDNA Quantitation Kit