PDF《使用说明书》

1 磁纳米・微萃取:为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案 使用说明书 【产品名称】链霉亲和素琼脂糖磁珠 【产品型号】MAg25K/Streptavidin 【目录号】P30 【产品介绍】 Enriching Beads? 链霉亲和素琼脂糖磁珠以交联琼脂糖为基质,Streptavidin 包被 在磁性微球表面,包被密度高达 8~10mg/mL (100% v/v).

可以用于分离生物素标记的 寡核苷酸、多肽或者蛋白等生物配体.与同类产品相比,Enriching Beads? 链霉亲和素 琼脂糖磁珠表面不仅拥有更多的生物素结合位点,而且多糖表面保证了其优良的非特异 性吸附特点. 【规格&参数】 平均粒径 25?m 固形物浓度 10% (v/v) medium slurry 分散液 PBS, pH 7.4, 0.1%BSA,0.02%NaN3 游离生物素结合量 >3,500pmol/100?L 生物素化寡核苷酸结合量 ~1200pmol(~12?g )/100?L for 30nt ss-DNA 生物素化抗体结合量 ~20?g /100?L 【产品特点】 ? 生物素结合位点丰富;

? 非特异性吸附低. 【作用对象】适用于生物素标记的蛋白、多肽、核酸、药物等生物配体液相捕获. 【有效期】两年(2~8 ℃保存). 【试剂准备】 1. 核酸捕获 - B&W Buffer (2X):10mM Tris-HCl (pH 7.5), 1mM EDTA, 2M NaCl;

- B&W Buffer (1X):5mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.5mM EDTA, 1M NaCl;

2. RNA 捕获: - Solution 1:0.1M NaOH, 0.05M NaCl(DEPC 处理);

- Solution 2:0.1M NaCl(DEPC 处理);

3. 蛋白/抗体捕获: - PBS Buffer, pH 7.4 (or PBST Buffer, PBS pH 7.4, 含0.01%(v/v) Tween 20;

or

2 磁纳米・微萃取:为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案 PBS/BSA Buffer, PBS pH 7.4, 含0.1%(v/v) BSA). 【耗材准备】ep 管(如进行 RNA 捕获,请使用无 RNA 酶ep 管),磁力架. 【操作流程】 1. 磁珠预处理 1.1 根据【规格&参数】表中生物配体结合量参数,计算磁珠使用体积(建议最小使用 量不要少于 20ul,取样太少易导致不同次加入的磁珠体积不一致);

1.2 将磁珠重悬均匀(e.g.涡旋震荡 30s,吹打或旋转混合 5min.磁珠重悬方法下 同),并转移所需要的磁珠体积至一支全新 ep 管中;

1.3 加入等体积(或至少 1mL)B&W Buffer (1X) (核酸捕获)或PBS Buffer(蛋白/ 抗体捕获),将磁珠重悬均匀;

1.4 使用磁力架磁吸至磁珠吸附完全,吸弃上清液;

1.5 重复 step 1.3 和1.4 三次. 2. DNA 捕获 2.1 向step 1.5 ep 管中加入双倍原始磁珠体积的 B&W Buffer (2X);

2.2 加入等体积的生物素化 DNA 的去离子水溶液至上述 ep 管中;

2.3 室温温柔旋转混匀,孵育 20~30min;

2.4 磁性分离,吸弃上清液;

2.5 使用 B&W Buffer (1X)清洗上述磁珠-核酸复合物 2~3 次;

2.6 直接进行后续核酸释放实验,或加入一定体积 B&W Buffer (1X)重新分散、待用. 3. RNA 捕获 3.1 向step 1.5 ep 管中加入大于磁珠原始体积的 Solution 1,涡旋振荡 2min,磁吸并 吸弃上清液(该清洗步骤操作两次);

3.2 使用 Solution 2,按照 step 3.1 的方法,清洗磁珠

1 次;

3.3 将磁珠重新分散于双倍原始体积的 Solution

2 中;

3.4 加入等体积的生物素化 RNA 的去离子水溶液至上述 ep 管中;

3.5 室温温柔旋转混匀,孵育 20~30min;

3.6 磁性分离,吸弃上清液;

3.7 使用 Solution

2 清洗上述磁珠-核酸复合物 2~3 次;

3.8 直接进行后续核酸释放实验,或者加入用一定体积 Solution

2 重新分散待用. 4. 蛋白/抗体捕获 4.1 向step 1.5 ep 管中加入一定体积 PBS Buffer 和生物素化的蛋白或者抗体溶液;

4.2 室温温柔旋转混匀,孵育 30min;