PDF《猪肥胖基因 CD调控区与内含子 7 的测序分析 及其两个新微卫...》

" 转录和酶活性的特异抑制, 致使 小鼠因代谢亢进而消瘦 [,,

] .中枢注射 &'()*+, 实 验小鼠表现摄食量的减少和生长激素 (?@) 分泌的 增加, 进一步的研究证实 &'()*+ 直接作用于垂体刺 激&@ 和?@ 的分泌, 同时刺激脑组织分泌促性腺 激素释放激素 (?+=@) [3, ,%] . 目前, 对肥胖调节的认识主要来源于 #"$ #" 小鼠, 而猪与人 &'()*+ 蛋白氨基酸的同源性 (#5$ /A) 高于鼠与人的同源性 (#3$ /A) , 表明猪与人的核苷 酸序列在进化上更为保守.对猪 !" 基因的分析使 其有可能成为研究人类肥胖病的有利动物模型 [,-] . 猪与人 !" 基因同源的更精确的定位也在研究中. 本研究报道了猪肥胖基因的调控区、 内含子 , 序列和两个新的微卫星 (!B,5/, !B%//) 的发现, 对潜在的调控元件进行了讨论, 分析了两个微卫星 的等位基因和基因型频率, 并做了微卫星多态性与 产仔性状的相关性的统计分析. ,. 材料和方法 !" !# 动物样本和 $%& 库 二花脸猪 (30 头) 来自江苏常熟畜禽良种场;

大 约克猪 (3# 头) 、 长白猪 (30 头) 、 约克夏猪 (3# 头) 来自烟台益生猪场.!" 基因的阳性 C";

库由本 实验室提供. !" '# 方# 法,D %D ,. 样品基因组和 C";

质粒的提取与纯化 基因组 " 在本实验室利用常规的酚E 氯仿 抽提制备, C";

质粒用碱裂解方法提取 [,3] . ,D %D %. 引物设计和探针标记 根据猪 !" 基因

4 /-3 7( (?'+CF+G 登录号: H55%43) 的4I端设计一对引物, J;

= 产物经克隆测 序鉴定后用于探针标记.引物由上海生工生物工程 有限公司合成.引物序列为 (K: 4I2L;

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(=: 4I2"2 ?L?"?LL?L?2-I. ,D %D -. C";

的!MN)O'P+ 杂交 阳性 C";

分别用多种限制性内切酶酶切, 脉冲 电泳转移到尼龙膜上, 与J;

=2" !$$< 为!"# $%, & 是('&) !! 为 重复序 列为 (-.) / (&.-.) / (-.) /, 有0个等位基因: ! 等位基因扩增片段 (12 $%,

3 为(1) $%, & 为(,1 $%,

4 为()2 $%, *+(," 是复合微卫星, 需测序鉴 定重复数.基因扫描图谱见图 2, 等位基因与基因 型频率见表 (. 图 图谱 ': *+(," 基因型 "#;

3: *+(," 基因型 ##;

&: *+!"" 基因 型!!.

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3: *+(," 56/789%6 ##;

&: *+!"" 56/789%6 !!: 表5"

6 个猪种肥胖基因的等位基因与基因型频率 7(84$ 5" 79$ 03$0 19$ +$%/12.$& (%< (44$4$& /0 19$ ./3'*%$ /8$0/;

3 83$$ AE #$$= 0/"# !.+1)/%*2 !"#$%"$, 3445, 674:

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