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网址:www.yeasen.com 第1页,共2页HB181127 Reactive Oxygen Species Assay Kit 活性氧(ROS)检测试剂盒 产品信息 产品名称 产品编号 规格 Reactive Oxygen Species Assay Kit 活性氧(ROS)检测试剂盒 50101ES01

1 Kit (1000 tests) 检测原理 活性氧检测试剂盒 (Reactive Oxygen Species Assay Kit) 是一种基于荧光染料 DCFH-DA (2,7-Dichlorodi -hydrofluorescein diacetate)的荧光强度变化,定量检测细胞内活性氧水平的最常用方法. DCFH-DA 本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜.进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成 DCFH,而DCFH 不 会通透细胞膜,因此探针很容易被积聚在细胞内.细胞内的活性氧能够氧化无荧光的 DCFH 生成有荧光的 DCF.绿色荧光 强度与活性氧的水平成正比.在最大激发波长

480 nm,最大发射波长

525 nm 处,使用荧光显微镜,流式细胞仪或激光共聚 焦显微镜等检测荧光信号.Rosup 为活性氧阳性诱导药物,根据其荧光信号强度,可分析活性氧的真正水平. 以96 孔板每孔加样量为标准,本试剂盒可测定约

1000 次. 产品组分 编号 组分 规格 保存方法 50101-A DCFH-DA(10 mM) 0.1 mL -20℃ 50101-B 活性氧阳性对照(Rosup,

100 mM) 1.0 mL -20℃ 运输与保存 冰袋运输.-20℃干燥保存,避免强光直射.有效期一年. 操作过程 1.装载探针 1.1 原位装载探针(仅适用于贴壁细胞) 1)细胞准备:检测前一天进行细胞铺板,确保检测时细胞汇合度达到 50~70%. 【注】:必须保证细胞状态健康,且检测时不会过度生长. 2) 药物诱导:去除细胞培养液,加入适量经合适的缓冲液或无血清培养基稀释到工作浓度的药物,于37℃细胞培养箱内 避光孵育,具体诱导时间根据药物本身特性,以及细胞类型来决定. (可选)阳性对照:先用无血清培养基等稀释阳性对照(Rosup,

100 mM)到常用工作浓度

100 μM,加入细胞,一般 37℃ 避光孵育

30 min-4 h 可显著看到活性氧水平提高, 但依细胞类型会有比较明显差异. 【如, HeLa 细胞孵育

30 min;

MRC5 人胚胎成纤维细胞 1.5 h;

】 3)探针准备:探针装载前按照 1:1000 用无血清培养液稀释 DCFH-DA,使其终浓度为

10 μM. 4) 探针装载:吸除诱导用药物,加入适当体积稀释好的 DCFH-DA 工作液.加入的体积以能充分盖住细胞为宜.例如;

对于6孔板通常不少于

1000 μL,对于

96 孔板通常不少于

100 μL.37℃细胞培养箱内避光孵育

30 min. 5) 细胞清洗:用无血清培养液洗涤细胞 1~2 次,以充分去除未进入细胞内的 DCFH-DA. 上海翊圣生物科技有限公司 客服热线:400-6111-883 E-mail: order@yeasen.com 本产品仅作科研用途! 第2页,共2页1.2 收集细胞后装载探针:适用于贴壁细胞和悬浮细胞. 1) 细胞准备:按照标准方法培养细胞,必须保证检测用细胞状态健康.按照适当方法,清洗并收集足量的细胞. 2)药物诱导:将收集好的细胞悬浮于适量稀释好的药物,于37℃细胞培养箱内避光孵育,具体诱导时间根据药物本身特性, 以及细胞类型来决定. (可选)阳性对照:先用无血清培养基等稀释阳性对照(Rosup,

100 mM)到常用工作浓度

100 μM,加入细胞,一般 37℃ 避光孵育

30 min-4 h 可显著看到活性氧水平提高, 但依细胞类型会有比较明显差异. 【如, HeLa 细胞孵育

30 min;

MRC5 人胚胎成纤维细胞 1.5 h;