PDF《高保真DNA聚合酶》

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网址: www.yeasen.com 第1页, 共2页HB190129 Hieff Canace? Gold High Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶 产品信息 产品名称 产品编号 规格 Hieff Canace? Gold High-Fidelity DNA Polymerase 高保真 DNA 聚合酶 10148ES10

10 U Hieff Canace? Gold High-Fidelity DNA Polymerase 高保真 DNA 聚合酶 10148ES60

100 U Hieff Canace? Gold High-Fidelity DNA Polymerase 高保真 DNA 聚合酶 10148ES76

500 U Hieff Canace? Gold High-Fidelity DNA Polymerase 高保真 DNA 聚合酶 10148ES80

1000 U 产品描述 Hieff Canace? Gold High-Fidelity DNA Polymerase 基于 Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase,经基因工程改造而成.该酶 具有 5'→3'DNA 聚合酶活性和 3'→5'核酸外切酶活性,其保真性是 Taq DNA 聚合酶的

52 倍,是普通 Pfu DNA 聚合酶的

6 倍.酶溶液中添加了热启动因子,极大提高了扩增的检出率和产物的特异性.酶溶液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段 扩增能力,扩增速度达到

15 sec/kb,扩增目的片段的长度可长达

10 kb.本产品配备了优化缓冲液,添加了 PCR 增强组分, 使得该酶适用于复杂模板的扩增.扩增产物为平末端. 产品组分 编号 组分 产品编码/规格 10148ES10 (10 U) 10148ES60 (100 U) 10148ES76 (500 U) 10148ES80 (1000 U) 10148-A Hieff Canace? Gold High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/μL)

5 μL

50 μL

250 μL

250 μL*2 10148-B 2*Canace? Gold PCR buffer(含Mg2+ ,dNTPs)

300 μL

1 mL*3

1 mL*15

1 mL*30 产品应用 基因克隆;

复杂 DNA 模板扩增;

高通量建库. 活性定义 用活性化的大马哈鱼精子 DNA 为模板/引物,74℃,30 min 内,摄入

10 nmol 的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为

1 U. 质量控制 核酸外切酶残留检测:20 μL 反应体系,10 U 本品和

1 μg λDNA CHind III,37℃下孵育

4 h,DNA 的电泳谱带无变化. 核酸内切酶残留检测:20 μL 反应体系,10 U 本品和

1 μg λDNA,37℃温育

4 h,DNA 的电泳谱带无变化. 大肠杆菌残留 DNA 检测:50 μL 体系中,加入

2 U 本品,以无菌 ddH2O 为模板,扩增 E.coil 16s rDNA 基因.30 个循环后 扩增产物进行 1% 琼脂糖凝胶电泳,EB 染色,无扩增条带. 运输与保存方法 冰袋运输.-20℃保存,有效期

2 年. 注意事项 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作. 上海翊圣生物科技有限公司 客服热线:400-6111-883 E-mail:order@yeasen.com 本产品仅作科研用途! 第2页,共2页 推荐 PCR 反应体系(冰上配制) 组分 体积 终浓度 ddH2O to

50 μL - 2*Canace? Gold PCR buffer (含Mg2+ ,dNTPs)

25 μL 1* DNA 模板 适量 - Primer 正向 (10 μM) 2.5 μL 0.5 μM Primer 反向 (10 μM) 2.5 μL 0.5 μM Hieff Canace? Gold High-Fidelity DNA Polymerase(2 U/μL) 0.5 μL

1 U/50 μL 【注】 : 1)试剂使用:使用前要充分解冻混匀. 2)聚合酶浓度:推荐使用

1 U/50 μL.可以在 0.5-2 U/50 μL 之间进行优化,请勿超过

2 U/50 μL. 3)聚合酶添加:为了防止聚合酶因 3'→5'外切酶活性降解引物,建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中. 4)Mg2+ 终浓度:体系终浓度为 1.5 mM.如有特殊需要,可用

50 mM MgCl2,以0.2-0.5 mM 为间隔向上摸索. 5)高GC 模板:在体系中加入终浓度为 3%的DMSO 可能有利于扩增. 6)不同模板的推荐使用量(50 μL 反应体系) : 模板种类 扩增片段

1 kb-10 kb 基因组 DNA

50 ng-200 ng 质粒或病毒 DNA

10 pg-20 ng cDNA 1-5 μL (不超过 PCR 反应总体积的 1/10) PCR 扩增程序:有以下三种程序可选择,优先选择两步法程序. 两步法程序(优先推荐) : 三步法程序(常规程序) : 循环步骤 温度 时间 循环数 循环步骤 温度 时间 循环数 预变性 98℃

3 min

1 预变性 98℃

3 min

1 变性 98℃

10 sec 30-35 变性 98℃

10 sec 30-35 延伸 68℃

30 sec/kb 退火 60℃

20 sec 终延伸 72℃

5 min

1 延伸 72℃

30 sec/kb 终延伸 72℃

5 min

1 梯度温度退火程序(难扩增基因推荐程序): *不同扩增程序下的特点: 步骤 温度 时间 循环数 程序类型 两步法 三步法 梯度退火 预变性 98℃

3 min

1 速度 最快 中等 慢 变性 98℃

10 sec 15, 每个循 环降低1℃ 特异性 高 中等 高 梯度退火 70-55℃

20 sec PCR 产量 中等 最高 中等 延伸 72℃

30 sec/kb 检出率 高 中等 高 变性 98℃

10 sec

20 正常退火 55℃

20 sec 延伸 72℃

30 sec/kb 终延伸 72℃

5 min

1 【注】 :1)预变性温度和时间:推荐温度:98℃,时间:3 min,高GC 含量模板 5-10 min. 2)退火温度和时间:推荐温度:60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度.推荐退火时间 设置为

20 sec,可以在 10-30 sec 内调节.退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状. 3)延伸温度和时间:推荐温度:72℃.时间:30 sec/kb,复杂模板根据实际情况可延长至

60 sec/kb. 4)扩增产物:请将 PCR 扩增产物放置于-20℃保存,防止该酶降解扩增产物.扩增产物为平末端.