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真菌/酵母细胞 β1, 3- D-葡聚糖合成酶活性定量检测试剂盒产品说明书 (中文版) 主要用途 真菌/酵母细胞 β1, 3- D-葡聚糖合成酶活性定量检测试剂是一种旨在通过 β1, 3- D-葡聚糖合成酶 反应系统中尿嘧啶核苷-5'-二磷酸葡萄糖底物聚合成葡聚糖,与荧光染料结合产生荧光峰值的变化,来测定 样品中酶活性的权威而经典的技术方法.

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的.其适用于各 种真菌或酵母细胞株裂解悬液中 β1,3- D-葡聚糖合成酶的活性检测.产品严格无菌,即到即用,操作简捷, 性能稳定,具有高通量特点. 技术背景 真菌/酵母细胞壁结构具有丰富的糖蛋白外层和碳水化合物内层, 包括 (1,3) -β-D, (1,6)-β-D和(1,3) -α-D- 葡聚糖(glucan) .其中(1,3)-β-D为主要元素.1,3-β-D-葡聚糖合成酶(1,3-β-D-glucan synthase;

GS;

EC.2.4.1.34) ,又称为尿嘧啶核苷-5'-二磷酸葡萄糖:1,3-β-葡萄糖基转移酶(UDP-glucose:1,3-β-glucosyl transferase),催化以尿嘧啶核苷-5'-二磷酸葡萄糖(UDP-glucose)为底物,通过1,3-β链接聚合为葡聚糖的 反应,构成真菌/酵母细胞壁结构中主要碳水化合物成分1,3-β-D-葡聚糖,为细胞生长所必需.1,3-β-D-葡聚 糖合成酶具有两种结构体:1个调节亚体,GTPase Rho1p和4个催化亚体,Bgs1p-4p或Fksp. (1,3)-β-D- 葡聚糖合成酶成为抗真菌药物,例如卡泊芬净(caspofungi)等的靶标.基于底物UDP-glucose在葡聚糖合 成酶的催化下,聚合成(1,3)-β-D-葡聚糖产物,与苯胺蓝(Aniline blue;

4,4-(carbonyl-bis(benzene-4,1- diyl)-bis-(imino)-bis-benzenesulfonic acid)反应产生复合物,呈现荧光峰值的变化(激发波长400nm,散 发波长460nm),由此定量测定β1,3- D-葡聚糖合成酶的活性. 产品内容 裂解液(Reagent A) 毫升 强化液(Reagent B) 毫升 缓冲液(Reagent C) 毫升 底物液(Reagent D) 微升 终止液(Reagent E) 微升 反应液(Reagent F) 毫升 稀释液(Reagent G) 微升 标准液(Reagent H) 微升 产品说明书

1 份 保存方式 保存在-20℃冰箱里;

反应液(Reagent F)避免光照;

终止液(Reagent E)具有腐蚀 性,注意操作安全;

有效保证

6 月1用户自备

15 毫升锥形离心管:用于真菌/酵母细胞收集的容器 1.5 毫升离心管:用于真菌/酵母细胞裂解操作或反应液配制的容器 台式离心机:用于沉淀真菌/酵母细胞 微型台式离心机:用于真菌/酵母细胞裂解悬液澄清 超速离心机:用于微粒体样品制备 恒温培养箱或恒温水槽:用于反应孵育 比色皿或酶标板:用于染色后荧光检测的容器 荧光分光光度仪或荧光酶标仪:用于荧光分析 实验步骤

一、 样品准备 1. 准备好

10 毫升待测的新鲜真菌/酵母细胞(OD600=0.4 至0.8,即1至2X107 细胞/毫升) 2. 移入到预冷的

15 毫升锥形离心管 3. 置于冰槽里

5 分钟 4. 放进 4℃台式离心机离心

10 分钟,速度为 3000g 5. 小心抽去上清液 6. 加入 xx 微升 裂解液( Reagent A ) ,充分混匀 7. 转移到预冷的 1.5 毫升离心管 8. 加入 xx 微升强化液(Reagent B) (注意:参见注意事项 3) 9. 强力涡旋震荡

15 秒10.置于冰槽里

1 分钟 11.重复实验步骤

9 至10 五次 12.加入 xx 微升 裂解液(Reagent A) ,充分混匀 13.放进 4℃微型台式离心机离心

10 分钟,速度为 1000g(或3500RPM,例如 eppendorf 5415) 14.小心移取

500 微升上清液到新的预冷的 1.5 毫升离心管 15.(选择步骤)如果使用微粒体样品,放进 4℃超速离心机离心