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2 - 2/ 弓王S第1

2 卷第4 期1997年

1 2月中国病毒学VI ROI OGI CA SI NI CA ;

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97 用不同载体在大肠杆 菌中表达 汉滩病毒囊膜糖蛋 白G1和G2黄长形 杨为松 I / 杭长寿 白雪帆 李光玉 c―――― 一―― ――― ( 第四军医大学唐都医院传染科.

西安

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【 中国预防医学科学院病毒・研究所,北京1

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0 f . / l 提要为提高汉滩病毒囊膜糖蛋白G

1 和G

2 的表达水平, 利用两种不同的表达载体 p K K

2 2

3 一'

3和 p GE X一4 T

1 构建 G1和G2的表达质粒 . 其中pGEX一4 T一1为融合蛋 白表达载体 .诱导所 构 建的 G1和G2表遗质粒 表达 G 1和G2 . 用表达的 G1 和G2免疫 小 白鼠诱 导产生的抗 汉滩病毒 特 异性 的间接 免疫荧光抗体摘度 无明显差别, 从而 说明表达载体对汉 滩病 毒G1和 G 2在大肠杆 菌 中的表达水平 影响不太 . 表达水平都较低 .同时, 利用 p G E X一4 T一1构建 G1 和G2的部分 多肽 的 表达 质粒, 但 表达水平较 完整的 G1 和(2无明显提高. . 、 ., . 煳词,墅船自G'

瀚外源蛋 自在大肠杆菌中的表达水平受编码蛋 自质的基因与表达载体质粒双重制 约. 只有 在编码蛋 自质的基因与表达载体相匹配的情况下, 蛋白质才能得到高效表达.换句话说, 一种 高效 表达载体可以高效表达 某些蛋白, 而不能高效表达另一些蛋 白质.一种 蛋白质可在某一 高效载体 中得以高效表达, 而在另外一些高效表达载体 中就不能高效表达.虽然在表达载体 p B V2

2 0中汉滩病 毒Gl 和G2蛋 白表达水平低, 但使用其它表达载体也许会提 高它 们的表达 量, 因此 , 在本研究 中我们尝试用其它两种高效表达载体 p KK2

2 3 ―3和pGE X%4 T一1表达 G1和G2.p GE X一4 T一1是一种高效融合蛋 自表达载体, 它消除了外源基 因起始信号 A T G 周 围核酸 序列对其 表达水平 的影 响.同时 融合 蛋 白有 可能 减少 表达 蛋 白质 对宿 主 细胞 的 毒性 , 这都有利 于外源蛋 自在大 肠 杆菌 中 的表达 . 本研究还利用 p GE X一4 T一1分别表达了 G1和G2蛋 白的前半部多肽, 目的有 两个 : (

1 ) 研究 GI和G2蛋 白前半部多肽的免疫特性 ;

(

2 ) 期望能提高表达量.因为 G1和G2编码基因 中含有大量大肠杆菌的稀有密码子, 妨碍了 G1和G2在大肠杆菌中的 表达, 缩短表达 蛋自的 长度 , 减少稀有密码子 , 也许会提高大肠杆菌对目的产物的表达水平. 材料和方法

1 材料 表达载 体质托 p GE x一4 T l 和pKK2

2 3 ―3由本室 保存 . p GE K

4 T 1为融 台蛋 白表达载 悼质粒 , I 蠡粒 收稿 日期 :

1 9

9 6 一I

2 嘶,修回日期 :

1 9

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3 ―2

4 料 其他怍者 : 第四军 医大学 唐者医院传染科 孙 永涛 李新红 张文帐 周永 维普资讯 http://www.cqvip.com 第 4期 黄 长形 等:用不同载体在大肠杆菌 中表达汉滩病 毒囊膜糖蛋 白G1 和G2

3 2

3 p B V

7 6 G1和pBV76C-2由本室构建 . 其余 实验 材料 来源见参考文献 J . .

2 方法2.1用pKK

2 2

3 ―3构建汉滩病 毒Gl 和G2表选 质粒 利用 E c o R [ 和last[两个酶 切位 点将 G

1 和G2编码 区基 因克隆 刊 质粒 p K K

2 2

3 ―3中构建表 达质 粒.质 粒构 建过程见示意 图1.用酶 切 图谱方 法对克隆的阳性质粒进行 鉴定.