PDF《司法鉴定》

3 个月. h) 内标纳洛酮标准物质溶液: 1) 1.0mg/mL 纳洛酮标准储备溶液:精密称取纳洛酮标准物质 10mg 置于 10mL 容量瓶中, 加入适量甲醇溶解并定容至刻度,配制成 1.0mg/mL 纳洛酮标准储备溶液.密封,置于冰 箱中冷冻保存,保存时间

12 个月;

2) 2?g/mL 纳洛酮标准工作溶液:移取 1.0mg/mL 纳洛酮标准储备溶液适量至容量瓶中,加 入甲醇稀释,混匀,配制成 2? g/mL 内标纳洛酮标准工作溶液.密封,置于冰箱中冷藏保 存,保存时间

3 个月. 5.2 仪器和材料 仪器和材料包括: a) 液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI);

b) 电子分析天平:感量 0.1mg;

c) 涡旋振荡器;

d) 离心机;

e) 恒温水浴锅;

f) 移液器.

6 操作方法 6.1 定性分析 6.1.1 样品前处理 6.1.1.1 案件样品 6.1.1.1.1 血液、尿液样品 移取血液或尿液0.4mL,加入乙酸乙酯3mL,涡旋混合,以2500r/min离心3min,将上清液转移至另 一试管中,在60℃水浴空气流下吹干,残留物用混合溶液〔甲醇:20mmol/L乙酸铵溶液 (体积比33:67)〕 100μL复溶,供仪器分析. 6.1.1.1.2 组织样品 称取剪碎组织0.4g,加入乙酸乙酯3mL,涡旋混合,以2500r/min离心5 min,将上清液转移至另一 试管中,在60℃水浴空气流下吹干,残留物用混合溶液〔甲醇:20mmol/L乙酸铵溶液 (体积比33:67)〕 100μL复溶,复溶液置于1.5mL离心管中,-20℃冷冻过夜,次日以13000r/min离心3min,取上清液于进 样小瓶中,供仪器分析. SF/Z JD0107023――2018

3 6.1.1.2 控制样品 取等量相同基质空白样品两份, 一份作为空白样品, 一份添加0.2μg/mL的雷公藤甲素和雷公藤酯甲 标准工作溶液10?L,作为添加样品,余下同6.1.1.1.1或6.1.1.1.2,与案件样品平行操作. 6.1.2 仪器检测 6.1.2.1 仪器条件 6.1.2.1.1 液相色谱条件 以下条件作为参考,可根据不同仪器实际情况进行调整: a) 色谱柱:Restek Allure? PFP Propyl 五氟苯基柱(或其它等效柱),100mm?2.1mm,5?m 注:Restek Allure? PFP Propyl柱为Restek公司产品的商品名称,给出这一信息是为了方便本技术规范的使用者,并 不是表示对该产品的认可.如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效产品. b) 流动相:A:甲醇,B:20mmol/L 乙酸铵溶液,流动相梯度洗脱程序见表 1;

表1 流动相梯度洗脱程序 时间(min) 流动相A(%) 流动相B(%)

0 33

67 3

33 67

7 5

95 10

33 67 c) 流速:300?L/min;

d) 柱温:室温;

e) 进样量:10?L. 6.1.2.1.2 质谱条件 以下条件作为参考,可根据不同仪器实际情况进行调整: a) 离子源:电喷雾电离-正离子扫描(ESI+) b) 检测方式:多反应监测(MRM);

c) 离子源电压(IS):5500V;

d) 碰撞气(CAD)、气帘气(CUR)、雾化气(GS1)、辅助气(GS2)均为高纯氮气,使用前调节各气流 流量以使质谱灵敏度达到检测要求;

e) 去簇电压(DP)、碰撞能量(CE)等电压值应优化至最佳灵敏度,参见附录 B. 在以上色谱、质谱条件下,雷公藤甲素和雷公藤酯甲与内标纳洛酮的定性离子对、定量离子对 和保留时间见表 2,色谱图参见附录 C. 表2 雷公藤甲素和雷公藤酯甲与内标纳洛酮的定性离子对、定量离子对和保留时间 化合物 定性离子对/ (m/z) 定量离子对/ (m/z) 保留时间/ (min) 雷公藤甲素 378.4/361.2 378.4/361.2 2.99 SF/Z JD0107023――2018

4 378.4/145.2 雷公藤酯甲 472.5/437.2 472.5/437.2 6.68 472.5/191.4 纳洛酮 328.3/310.1 328.3/310.1 4.75 328.3/253.2 6.1.2.2 进样 分别吸取案件样品、空白样品和添加样品提取液,按6.1.2.1条件进样分析. 6.1.2.3 记录 记录各样品中雷公藤甲素、雷公藤酯甲可疑色谱峰的保留时间、离子对丰度比. 6.1.2.4 定性判断依据 以保留时间、质谱特征碎片离子峰和离子对相对丰度比作为定性判断依据. 如果案件样品中出现雷公藤甲素或雷公藤酯甲两对定性离子对的特征色谱峰, 保留时间与添加样品 中相应标准物质的色谱峰保留时间比较,相对误差在?2.5%以内,且定性离子对丰度比与浓度相近添加 样品的离子对丰度比之相对误差不超过表3规定的范围,则可判断案件样品中存在雷公藤甲素或雷公藤 酯甲成分. 表3 相对离子对丰度比的最大允许相对误差(%) 相对离子对丰度比 >