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项目编号: 项目类别: 农业转基因生物安全评价 申报书转cp4 epsps基因抗农达? 甜菜H7-1作为 加工原料进口的安全证书 孟山都远东有限公司北京代表处 2009年2月20日 中华人民共和国农业部制 孟山都公司申请书_H7-1

1 农业转基因生物安全评价 申报书项目名称:转cp4 epsps基因抗农达? 甜菜H7-1作为加工原料 进口的安全证书 申请单位:孟山都远东有限公司北京代表处 申请人: 地址: 北京市朝阳区工体北路甲2号盈科中心写字楼B座901室 邮政编码:100027

电话: 传真: e - mail: 填报日期:2009年2月20日 孟山都公司申请书_H7-1

2 孟山都公司文件 ?

2009 孟山都公司 版权所有 侵权必纠 本申请书受著作权法保护.

本申请书只限于由孟山都公司提交的农业转基因生物安全行政主 管部门使用,并且只能用于本申请书的申请目的.没有孟山都公司的事先书面同意,任何出于其 它目的使用本申请书将被严格禁止.孟山都公司提交本申请书给相关行政主管部门并不表示孟山 都公司批准任何个人或实体获得任何权利对本申请书中涉及的知识产权进行授权许可或使用. 孟山都公司申请书_H7-1

3 填写说明1. 在填写申报书之前,应认真阅读《农业转基因生物安全管理条例》、《农业 转基因生物安全评价管理办法》、《农业转基因生物进口安全管理办法》等 有关法规,了解相关的要求、标准和技术规范. 2. 此申报书同样适用于试验研究和中间试验的报告,但名称分别改为 农业转基 因生物试验研究报告书 和 农业转基因生物中间试验报告书 ,有些不使用的 条款可以不用填写.例如:实验研究的报告书就不用填写试验方案. 3. 申报书内容应当包括以下部分:目录、申请表、项目内容摘要、工作目的和 意义、国内外相关研究的背景资料、农业转基因生物安全评价、试验方案、 相关附件资料、申报单位农业转基因生物安全小组审查意见、申报单位审查 意见、所在省(市、自治区)的农业行政主管部门的审查意见. 填写申请表时,申请实验研究、中间试验、环境释放和生产性试验按表2 填写;

申请农业转基因生物安全证书按表3填写. 申报书中安全评价、试验方案和相关附件资料部分依照附件I、II、III要求 逐条填写. 4. 申报书应当用中文填写,一式十份,一律使用 A4 纸,正文用小四宋体打印, 标准字间距和单倍行距,并提供软盘或光盘.对于不符合要求的申报书,不 予受理. 5. 申请者可以注明那些资料属于机密并说明理由. 6. 对于已批准过的环境释放或生产性试验,在试验结束后,若同一转基因生物 在原批准地点以相同规模重复试验,在申报时 安全性评价 部分可以省略. 7. 受理时间:每年三次,截止日期分别为

3 月1日,7 月1日和

11 月1日. 8. 受理单位:农业部科技发展中心. 地址:北京朝阳区麦子店街18号楼.邮政编码:100026.收款单位:农业部科技 发展中心;

开户行:农行北京朝阳支行营业部;

账号:010404010003699. 孟山都公司申请书_H7-1

4 目录内容页码 安全评价技术报告目录(技术报告为商业保密资料(CBI)5 保密商业资料(CBI)声明

6 孟山都公司关于农业部批复信函的说明

7

一、农业转基因生物安全证书申请表

9

二、项目内容摘要

11

三、工作目的和意义

13

四、国内外研究的相关背景资料

14

五、转基因植物的安全性评价

17 1. 受体植物的安全性评价

17 2. 基因操作的安全性评价

23 3. 转基因植物的安全性评价

46 4. 转基因植物产品的安全性评价

99 参考文献

103

六、相关附件资料

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七、本单位农业转基因生物安全小组审查意见

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八、 本单位审查意见

152

九、所在省(市、自治区)的农业行政主管部门的审查意见.153 孟山都公司申请书_H7-1

5 安全评价技术报告目录(技术报告为商业保密资料(CBI)) 报告 编号 技术报告名称 报告1 抗农达甜菜H7-1的分子生物学特征(PLT6016-1MA) 报告2 1999年在欧洲田间试验中抗农达甜菜H7-1地上部叶片和根部组织中CP4 EPSPS蛋白组 织表达水平的评价(Monsanto Study Report, MSL-17007) 报告3 1998-1999年德国田间试验中抗农达甜菜H7-1及常规对照品系生长发育及表现型和发 育观察结果――实质等同性评估(KWS Study Report, KWS 6016-1) 报告4 利用AD

4、TOXIN5和ALLPEPTIDES数据库进行CP4 EPSPS蛋白的生物信息学分析 (Monsanto Study Report, MSL-18752) 报告5 CP4 EPSPS蛋白的小鼠急性口服毒性试验(Monsanto Study Report, MSL-13077) 报告6 H7-1和大肠杆菌生产的CP4 EPSPS蛋白理化性质和功能等同性评价 报告7 抗农达转化体H7-1甜菜浆 90天大鼠喂养试验(Monsanto Study Report, MSL-18820) 报告8 转基因甜菜H7-1的90天大鼠喂养试验(中国疾病预防控制中心检测报告) 报告9 大肠杆菌纯化的CP4 EPSPS蛋白在模拟胃液中离体消化分析(Monsanto Study Report, MSL-17566) 报告10 1999年在欧洲田间试验中抗农达甜菜H7-1及非转基因对照品系地上部叶片和根部组织 营养成分分析(Monsanto Study Report, AGREN 27.10.99) 报告11 世界经合组织关于甜菜新品系营养成分考虑的一致性文件――食用饲用营养成分和抗 营养因子(OECD: http://www.olis.oecd.org/olis/2002doc.nsf/LinkTo/env-jm- mono(2002)4) 报告12 转基因抗农达甜菜H7-1食用安全性综合评价报告(中国疾病预防控制中心) 报告13 抗农达甜菜H7-1基因插入位点的旁侧序列确定(PLT6016-4MA) 报告14 抗农达甜菜H7-1的特异性定性PCR检测方法(PLT6016-2MA) 报告15 抗农达甜菜H7-1的特异性定量PCR检测方法 报告16 转基因甜菜H7-1干甜菜浆抗营养因子皂角苷含量检测报告(农业部转基因生物食用 安全监督检验测试中心(北京)) 报告17 转基因甜菜H7-1干甜菜浆全组分检测报告(农业部转基因生物食用安全监督检验测试 中心(北京)) 孟山都公司申请书_H7-1

6 保密商业资料(CBI)声明 本申请书包含了许多属于孟山都公司和KWS公司开发并拥有的商业保密资料 (CBI,Confidential Business Information).这些商业保密资料(CBI)是由孟山都 公司和KWS公司投入巨大的人力物力,经过长时间的研究获得,包括研究路线的制 定、各种表达调控元件的DNA序列、遗传操作策略和各种安全评价的数据等资料. 孟山都公司和KWS公司目前只向世界各国农业转基因生物行政主管部门提交这些 CBI资料用于安全评价和审批的目的,而从未公开发表或向公众提供.孟山都和 KWS公司在中国国内外面临着许多技术实力很强的竞争对对手,一旦竞争对手获得 这些资料,竞争对手将会以很少人力物力投入在很短的时间内看发出类似H7-1的相 应产品,这对孟山都和KWS公司来说是不公平的.因此,孟山都和KWS公司依据 《农业转基因生物安全评价管理办法》

第三章第二十七条的有关规定以及本申请书 的填写说明,要求对本申请书的CBI资料进行保密. 孟山都公司申请书_H7-1

7 孟山都公司关于农业部批复信函的说明 问题1 - 未提供目的基因插入位点的旁侧序列及特异性定性检测方法 1) 目的基因插入位点的旁侧序列, 5'

-和3-端旁侧序列见下图,并详见报告13. 5'

-端侧翼序列: 上图为甜菜H7-1的DNA序列与质粒DNA序列比对结果,上一行为H7-1的DNA序列,下 一行为PV-BVGT08质粒序列.H7-1的DNA序列中加下划线并字体加粗的部分为5'

端侧 翼序列,箭头所指位置为外源基因插入位点;

PV-BVGT08质粒序列中加下划线并字体 加粗的部分为右边界(Right Border). 3'

-端侧翼序列: 上图为甜菜H7-1的DNA序列与质粒DNA序列比对结果,上一行为H7-1的DNA序列,下 一行为PV-BVGT08质粒序列.H7-1的DNA序列中加下划线并字体加粗的部分为3'

端侧 翼序列,箭头所指位置为外源基因插入位点;

PV-BVGT08质粒序列中加下划线并字体 加粗的部分为左边界(Left Border). 2)特异性定性PCR检测方法:报告14和报告15分别为特异性定性和定量PCR检 测方法. 涉及商业保密资料,在本公开版本中已删除 涉及商业保密资料,在本公开版本中已删除 孟山都公司申请书_H7-1

8 问题2 - 未提供农业部认定检测机构出具的抗营养因子皂角苷的检测报 告 皂角苷是天然存在于大豆、豌豆、马铃薯、茶叶和糖用甜菜等众多粮食和饲料 作物里的三萜系苷(Oakenfull和Sidhu, 1989).世界经合组织关于甜菜新品种营养和 抗营养成分的一致性文件(OECD, 2002)并未将皂角苷视为抗营养因子,也没有将 其视为在评价甜菜品种的营养一致性时需要考虑的化学成分.甜菜榨糖副产品会由 于皂角苷的存在引起反刍动物拒食,因此文献中将皂角苷看作拒食素,但迄今没有 皂角苷对人类和动物不良影响的报道.孟山都公司和KWS公司在对抗农达甜菜H7-1 进行食用安全性评价时将皂角苷作为抗营养成分进行了分析. 甜菜中的皂角苷最初是以齐墩果酸(Oleanolic acid)配糖的形式在叶片和根组 织中被发现的,齐墩果酸(Oleanolic acid)是甜菜皂角苷最普遍的糖苷配基,因此 甜菜中皂角苷的含量测定是通过HPCL法分析齐墩果酸的含量进行的.甜菜根齐墩 果酸含量的文献值域为75-965mg/kg鲜重(Lüdecke et.al, 1958). 由农业部转基因生物食用安全监督检验测试中心(北京)对H7-1 和对照干甜菜 浆中齐墩果酸的含量进行了检测,结果分别为148mg/kg干重和121mg/kg干重,折合 为鲜重不会超过上述文献值域,说明抗农达甜菜与其亲本对照抗营养因子含量不会 有营养学和生物学意义上的不利影响,检测报告见报告16. 该测试中心对H7-1和亲本对照干甜菜浆全组分营养成分分析(报告17)和中国 疾病预防控制中心进行的90天大鼠喂养结果(报告8)也表明:H7-1和亲本对照干甜 菜浆主要营养成分及其含量无营养学和生物学意义上的显著差异,抗农达甜菜H7-1 对大鼠生长状况、食物利用、生存率、体征等方面的影响与亲本对照无生物学意义 上的显著差异.综合对受体(栽培型甜菜3S0057)、供体生物(农杆菌CP4小种)、 基因操作(农杆菌介导转化)以及H7-1和对照成分分析、新表达蛋白毒性、致敏性 等多方面的资料进行分析,认为抗农达甜菜H7-1与非转基因甜菜不存在生物学和营 养学上的差异,现有的食用安全性资料未发现H7-1与对照在食用安全性上存在差 别.(报告12,食用安全综合评价报告) 孟山都公司申请书_H7-1

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一、农业转基因生物安全证书申请表 项目名称 转cp4 epsps基因 抗农达? 甜菜 H7-1作为加工原料进口的安全证书 项目来源 孟山都公司 转基因生物概况类别动物 ? 植物 ? 微生物 ? (用√表示 ) 转基因生物名称 抗农达甜菜H7-1 受体生物 中文名甜菜 学名Beta vulgaris 分类学地位藜科、甜菜属 品种(品系) 名称 3S0057 安全 等级 I 目的基因1 名称cp4 epsps 供体生物 Agrobacterium sp. strain CP4 生物学功能 表达CP4 EPSPS蛋白使转基因植物耐受草甘膦类除草剂. 启动子 P-FMV 终止子 E9 3'

载体1 PV- BVGT08 供体生物 Escherichia coli 载体2 …… *标记基因1 名称 无 供体生物 启动子 终止子 *标记基因2 名称 供体生物 启动子 终止子 …… 名称 供体生物 启动子 终止子 *报告基因1 名称 无 供体生物 启动子 终止子 *报告基因2 名称 供体生物 启动子 终止子 …… 名称 供体生物 启动子 终止子 孟山都公司申请书_H7-1

10 调控序列1 名称 转移肽序列Ctp2 来源 拟南芥 功能 协助CP4 EPSPS蛋白向叶绿体转移 调控序列2 名称 来源 功能 …… 名称 来源 功能 转基因方法 农杆菌介导法 基因操 作类型

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3 转基因生物安全等级 I 转基因生物产品安全等级 I 试验概况中间试验 转基因生物名称及编号 试验的时间、地点和规模 环境释放 转基因生物名称及编号 批准文号 批准时间、地点和规模 生产性试验 转基因生物名称及编号 批准文号 批准时间、地点和规模 申请单位概况单位名称 孟山都远东有限公司 北京代表处 地址 北京市朝阳区工体北路甲2 号盈科中心B座901室 邮编

100027 电话 传真 电子邮件 申请人姓名 电话 传真 电子邮件 联系人姓名 电话 传真 电子邮件 * 若删除,应该在表中标注. (注:进口转基因生物直接申请安全证书的,本表 试验概况 一栏不填写) 孟山都公司申请书_H7-1

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二、项目内容摘要 美国孟山都公司和德国 KWS SAAT AG 公司 (以下分别称为孟山都和KWS) 共同提交此申请,目的是请求批准进口抗农达? 甜菜作为加工原料的安全证书,拟进 口的主要产品是糖,经过榨糖工艺得到的糖基本不含转基因成分.进口该类甜菜是 抗农达转化体H7-1(简称H7-1转化体),或是这一转化体经常规育种方法得到的后 代.转化体H7-1对草甘膦耐受性是由一个插入的cp4 epsps编码序列基因盒赋予的, 这个基因盒能使受体植物编码生成源自于农杆菌小种CP4的5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷 酸合成酶(EPSPS)蛋白.草甘膦是农达农用除草剂的有效成分,经基因改良的植株 在喷施草甘膦时不........