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电话:010-59822688 WWW.TIANGEN.COM 产品简介 产品简介 产品简介 产品简介: : : : 本产品适用于Probe 探针杂交法进行模板的荧光定量PCR 检测,RealMasterMix 中提供了一种独特的 Hot-start 酶(已获得专利) ,我们命名为 Hotmaster Taq DNA 聚合酶(包含在 2.5*realMasterMix 中) ,该酶与一般 Hot-start 酶不同之处在于,一般的 Hot-start 酶只在第一步温度升高之前封闭酶的活性,而Hotmaster Taq DNA 聚合酶利用抑制剂通过温度调节方式封闭 Hotmaster Taq DNA 聚合酶的底物结合位点,温度低于 40℃时,形成非活性的酶-抑制剂复合物,当温度 升高至引物特异性的退火温度时, 结合平衡向模板-特异性引物复合物形成方向移动, 因此最大限度的减少 PCR 扩增全程中的非特异性扩增产物产生, 大大提高了荧光定 量PCR 反应的精确性. 反应的 buffer 系统包含 dNTP, 增强剂, 稳定剂等以提高产物特异性和反应灵敏 度.RealMasterMix 拥有特殊的 Mg 2+ 自动调节系统,在整个反应过程 Mg 2+ 始终保持 最佳浓度,提高扩增效率. 需自备的试剂 需自备的试剂 需自备的试剂 需自备的试剂: : : : 1.分子生物学实验级别的水(无核酸酶) 2.DNA 模板 3.PCR 引物 操作步骤 操作步骤 操作步骤 操作步骤: : : : Probe 探针杂交法 探针杂交法 探针杂交法 探针杂交法 反应体系 反应体系 反应体系 反应体系 组成成分 50?l 体系 25?l 体系 20?l 体系 终浓度 2.5*realMasterMix 20?l 10?l 8?l 1* 正向引物 - - - 100-900nM 反向引物 - - - 100-900nM 探针 - - - 50-300nM 20*ROX Reference Dye* - - - - 20*Probe Enhancer solution 2.5?l 1.25?l 1.0?l 1* DNA 模板 - - - -ng-pg 超纯水 至50?l 至25?l 至20?l - * 对于使用 ABI 7500/Stratagene 仪器时,ROX Reference Dye 的终浓度为 0.5* 对于使用 ABI 7300/7700/7900 仪器时,ROX Reference Dye 的终浓度为 1* TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD. Order: 010-59822688 Technical: 010-59822661/2665 Toll-free: 800-990-6057 PCR 检测 检测 检测 检测: : : : HotMaster Taq DNA 聚合酶与其他热启动 Taq 酶不同之处是不需要热激活处理, 缩短了整个 PCR 所需时间. 对于大多数模板, 起始的解链过程只需 94-95℃ 1-2 分钟. 如果模板的 GC 含量很高,则起始解链过程时间需延长至 10-15 分钟,为得到最佳结 果,对不同的模板可采用梯度 PCR 优化反应条件. 注意 注意 注意 注意: : : :HotMaster Taq DNA 聚合酶的延伸温度范围是 60-70℃,最佳延伸温度为 68℃. 两步 两步 两步 两步 PCR: : : : 循环 步骤 温度 时间 内容 1*

1 94-95℃ 1-2 分钟* 起始模板变性

2 94-95℃ 10-20 秒PCR 循环中模板 变性 35-45*

3 60℃ 20-60 秒 退火/延伸 三步 三步 三步 三步 PCR(建议使用 建议使用 建议使用 建议使用): : : : 循环 步骤 温度 时间 内容 1*

1 94-95℃ 1-2 分钟* 起始模板变性

2 94-95℃ 10-20 秒PCR 循环中模板 变性

3 50-60℃ 10-30 秒 退火 35-45*

4 68℃ 10-60 秒 延伸 * 解链时间的长短与模板的长度和 GC 含量有关 RealMasterMix (Probe) 目录号 目录号 目录号 目录号: : : :FP203- - - -S 试剂盒内容 试剂盒内容 试剂盒内容 试剂盒内容: : : : 试剂盒组成 试剂盒组成 试剂盒组成 试剂盒组成 FP203-01

50 次次次次*50?l 体系 体系 体系 体系 FP203-02

200 次次次次*50?l 体系 体系 体系 体系 2.5*RealMasterMix 1.0 ml 4*1.0 ml 20*Probe Enhancer Solution