PDF《ExFect?2000 Transfection》

T202 www.

vazyme.com 使用说明书 Vazyme biotech co., ltd. www.vazyme.com ExFect?

2000 Transfection Reagent Version 7.1 Web: www.vazyme.com Tel: 400-600-9335 Sales: sales@vazyme.com Support: support@vazyme.com Service: service@vazyme.com Vazyme Biotech Co., Ltd 企业已通过 国际质量管理体系认证 ISO 9001:2015 SYSTEMS www.vazyme.com 目录Contents 01/产品概述 组分T202-01 T202-02 T202-03 01/

02 ExFect2000是一种基于阳离子脂质体的高效转染试剂,适用于DNA的转染及共转体系,对大 多数真核细胞(贴壁或悬浮)具有很高的转染效率.独特的结构及配方,使得血清和抗生素的 存在不会影响转染效率,从而减少去除血清对细胞的影响.细胞转染后,24-48 h内无需去除 核酸-ExFect2000复合物或更换培养基.目前ExFect2000转染试剂已在多种细胞系以及实验 体系中进行验证,均具有较高的转染效果. ExFect2000 Transfection Reagent 0.5 ml

1 ml

5 ml 2-8°C保存,不可冷冻. 使用之前请颠倒混匀.如果出现不溶性物质,请先震荡混匀,若不能溶解,请以1000 rpm/min离心后再 使用. 03/保存条件 HEK 293, 293T, A549, B16F10, HCT116, WRL68, MDA-MB-231, Vero, HeLa, Hepa 1-6, Hepa 1cLc7, HepG2, BHK-21, BNLCL.2, C2C12, C6, CHO K1, COS-1, COS-7, Daoy, DU 145, K562, KB, LL/2 (LLC1), LNCaP-FGC, MCF-7, MEL, Neuro 2a, NIH3T3, OVCAR-3, PC-3, PC-12等. 本产品仅用于细胞生物学及其它科学研究目的,不能应用于临床诊断和治疗. 04/适用范围

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04 05 01/产品概述 02/产品组分 03/保存条件 04/适用范围 05/自备材料 06/注意事项 07/实验流程概要 08/实验步骤 08-1/影响转染效率的因素 08-2/转染体系调整 08-3/细胞瞬时转染操作流程 09/常见问题及解决方案 05/自备材料 质粒DNA提取:QIAGEN大提试剂盒或其它等效产品;

细胞接种:细胞(购自ATCC或其它可靠来源),细胞培养基(对应细胞,gibco),FBS,胰酶,血球计数板,多孔细胞培养板等;

ExFect2000/DNA包装:推荐使用opti-MEM(或者其它无血清,无双抗细胞培养基),1.5 ml EP管等;

其他材料:PBS,移液器,移液管,15 ml离心管,T-75细胞培养瓶,二氧化碳细胞培养箱 等. 02/产品组分 www.vazyme.com 03/

04 细胞密度随细胞系不同会有很大差别,且细胞密度直接决定转染效率.因此在转染过程 中尽量保持同样的接种比例,以提高转染重复性. ExFect2000转染试剂与opti-MEM、DNA与opti-MEM的包装过程应分开进行,之后再将 ExFect2000-培养基混合物与DNA-培养基混合物轻柔混匀;

同时避免包装反应体系中存 在血清,因为血清会干扰ExFect2000与DNA复合物的形成. 在包装过程中,应将DNA稀释液滴加到ExFect2000稀释液中,不能将ExFect2000稀释 液滴加到DNA稀释液中. 转染实验手法需轻柔,转染试剂、DNA与opti-MEM的混合以及ExFect2000-培养基混合 物与DNA-培养基混合物的混合应注意用移液枪轻轻混匀或者手指轻弹离心管底部混匀. 转染时需使用高质量的DNA(高纯度、无菌、无内毒素). 06/注意事项

5 min Mix

5 min 5-10 min CELL 细胞涂片/爬片 接种细胞,待细胞 汇合度达到60%-80% 时进行转染 分别用opti-MEM 稀释DNA和转染试剂, 轻柔混匀 将稀释的DNA滴加至 稀释的转染试剂中 (1:1),轻柔混匀 室温,孵育 将DNA-转染试剂复合物 滴加至细胞中,置于 细胞培养箱中培养 对细胞进行 后续实验处理 Day0 Day1 Day2-4 07/实验流程概要 08/实验步骤 08-1/ 影响转染效率的因素 1.细胞培养基:ExFect2000 Transfection Reagent适用于大多数常用的细胞培养基,且转染前后不 需要更换培养基,血清的存在不影响转染效率. 2.转染时细胞密度:一般来说,当细胞密度达到60%~80%时转染效率较高.然而,不同细胞的最 适转染密度都不尽相同.因此在初次转染某种细胞时,可以通过预实验先确认该细胞最佳的转染密 度. 3.DNA纯度和浓度:用于细胞转染的DNA应具有较高的纯度,且无内毒素残留(推荐使用无内毒素 提取试剂盒).推荐24孔板中对应每孔DNA转染量为0.5~1 μg.不同培养体积推荐的DNA使用量请 参见表一(08-2). 4.DNA与ExFect2000转染试剂的比例:在初次转染某种细胞时,推荐DNA和转染试剂的比例为 1:2或1:3,即1 μg DNA使用2 μl或3 μl转染试剂.转染1 μg DNA所使用的转染试剂可以在1 μl~3 μl 之间进行调整,以便获得最佳的转染效率. 5. 转染后孵育时间:对于绝大多数细胞而言,培养24~48 h即可.如特殊情况,培养时间可在12~