PDF《黄亚东,郑 青 ,王 林川2,李校垄料,黄 自然 3》

第17卷 3期2002年 8月中国病毒学VI R0L 0GI CA SI NI CA

1 7 (

3 ) :

2 6 6―2

6 9 Augu s t

200 2 I B V广东 分 离株 GD

0 5 S1 基因的克 隆、鉴定及其 表达黄亚东,郑 青,王林 川2 , 李校垄料, 黄 自然3 (

1 .

暨 南大学 医 药生 物技 术研 究开 发中 心,广州510632;

2 . 华南 农业大 学动 物 医学 系,广州510642;

3 . 华南 农业大 学 蚕桑 系.广州510642)Cl on i ng a nd De t e r m i na t i o n of S

1 Ge n e o f I BV G D0

5 St r a i n a nd I t s Expr e s s i o n i n E . c o l i. HUANG Ya ― d o n g , Z HEN Qi n g , W ANG Li n ― c h u a n

2 , LI Xi a o - k u n , HUANG Z i ― r a n ( 1. Bi o p h ar ma c e u t i c R D c e n t e r o f J i n a n Un i v e r s i t y, Gu a n g z h o u

5 1

0 6

3 2, C h i n a;

2. De p a r t me n t o f v e t e r i n a r y me di c i n e S o u t h c h i n a A g r i c u l t u r e Un i v e r s i t y, @u a n g z h o u

5 1

0 6

4 2 , C h i n a;

3 . D e p a r t me n t o f S e r i c u l t u r e , S o u t h c h i n a A g r i c u l t u r e Un i v e r s i t y , Gu a n g z h o u

5 1

0 6

4 2 , C h i n a ) Ab s t r a c t :Ac o r d i n g t O Av i a n I n f e c t i o u s Br o c h i t i s v i r u s ( I BV )Be a u d e t t e s t r a i n S

1 g e n e s e q u e n c e , a pa i r of pr i m e r s we r e de s i gne d a n d s y nt he s i z e d. W i t h t h e p r i m e r s , I BV Gua n gd o ng i s ol a t i on s t r a i n GD05 S

1 ge ne wa s s u c c e s s i v e l y a mpl i f i e d by RT ― PCR . PCR pr o du c t wa s d i ge s t e d w i t h Bs t Y I ,Ha e I I I a nd Ps t I r e s pe c t i ve l y, t he r e s u l t s h owe d RFLP p a t t e r n o f wa s t he s a m e a s t ha t of M

41 S

1 g e ne. I BV GD05 s t r a i n wa s t h ou ght a s M a s s s e r ot y pe pr i m a r y l y.I BV GD05 S

1 ge ne wa s c l o ne d i n t o pGEM ― T v e c t o r a nd s e q u e nc e d, i t s s e q ue nc e wa s c o ns i s t e d o f

1 611 ba s e pa i r s. By c ompa r i s o n , t he nu― c l e ot i d e s e q ue nc e wa s 97.

1 4% i de nt i c a l t O t ha t of I BV M 41. I BV GD05 S

1 ge ne wa s s u bc l on e d i nt o e xp r e s s i o n v e c t o r pET21 d.SDS― PAGE e xp e r i m e nt s h owe d t ha t i t e x pr e s se d i n E . c o l i. Ke y wo r d s :Av i a n I n f e c t i o u s B r o n c h i t i s Vi r u s ( I BV) ;

S

1 g e n e ;

Cl o n i n g ;

Ex p r e s s i o n 关 键词 :I B V;

S1基因;

克隆 ;

表达 中图 分类 号:$852.65文章标 识码:A文章 编号:1

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3 ―

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0 4 鸡传染性支气管炎病毒(InfectiousBrochitisvirus,IBv) 属于冠状病毒科冠状病毒属,可引起鸡呼吸道 、 输卵管、肾脏 、 肠道 及腺胃等 多部 位病 变.近年来 , 由于 新的IBV变异毒 株不断出现 , 从而 导 致鸡 传染性支气管炎病的不断爆发,造成严重的经济损失[,.IBV的基因组为单股RN'

A, 主要编码3种 主要结构蛋白:纤突蛋白(S) 、 膜蛋白(M) 和核衣壳 蛋白(N) , 其中s蛋 白成熟裂解为s1和 s 2两个蛋白亚 基.s1蛋 白是 I B V 的主 要免疫原基因,可刺激机体产生中和抗体,决定病毒的组 织亲嗜性 , 在病毒血清学分类中起主要作用L1.3J.GD0 5株是从广东地方鸡场 分离 获得 的典型 肾病 变IBV毒株 , 本研究利用RT―P C R方法成功地从GD05中 扩增出S1基因,对扩增产物进行Bs t Y I , Ha e I I I 和￡I 酶 切和 序列 分析 , 并将IBVS1基 因亚 克 隆到 表达 载体pET