PDF《第13 章 生殖生物技术在动物迁地保护中的应用》

144 遗传多样性研究的原理与方法 13.1.1.2 假阴道采精法 此方法适用于体型较大的动物,如牛等.其原理为利用台牛(常为同种母牛)来诱导种公 牛,导致其性兴奋,待种公牛爬跨台牛并产生射精动作时,立即用假阴道收集精液.下面以我 室建立大额牛(Bos frontalis)采精方法为例来介绍此技术. 材料: 雄性和雌性性成熟大额牛数头(须没有传染病和生殖系统疾病) ,牛采精用保定架,假阴道

2 套,医用凡士林,温度计

2 只,pH 试纸或 pH 计. 方法: 首先将用作台牛的雌性大额牛一头固定在保定架上,安装好假阴道并从注水孔向内注入热 水,然后通过注水嘴阀门用力向内吹气.再用凡士林润滑假阴道内胎,并测量假阴道内腔的温 度,要求假阴道内腔的温度应在 40~50℃之间.随后将待采精的雄性大额牛牵到固定好的雌性 大额牛背后.采精人应右手持假阴道,并使假阴道与牛体保持平行站于牛的右侧.待公牛爬跨 台牛时, 迅速用左手握着公牛的阴包 (不能握着伸出的阴茎, 否则将导致阴茎缩回或立即射精) , 将伸出的阴茎导入假阴道.观察到牛的射精动作(腹部用力前挺)时,采精过程即完成.采到 的精液要立即测量并记录其 pH 值,然后再用血细胞计数器计算精子浓度,以决定稀释倍数.随 后用冷冻保护液(见精液冷冻)按一定的比例对精液进行稀释.通常情况下,一头种公牛每星 期可采精两次. 13.1.2 精液的冷冻 精液、卵和胚胎的冻存对于人类医学、家畜繁殖及野生濒危动物的保护都有重要意义.在 过去几十年的研究中,已有许多喜人的进展,在实验动物、家畜、非人灵长类及人类中,均有 不少精液、卵、胚胎冻存成功的报道.在野生动物中,已有累计

21 个种的冷冻精液用于人工授 精获得成功,其中有

11 个种是被列入红皮书的珍稀濒危动物(Rott 1995) .许多国家已建立了 相当规模的精子库及胚胎库, 其中值得注意的是独具特色的 Jackson 实验室的实验动物胚胎库, 它收集、冻存了许多转基因小鼠的胚胎和基因去除小鼠(gene knock out mice)胚胎,这 实际上是为医学生物学研究保存了具有现实意义的动物模型资源.小鼠的精子、卵、胚胎的冻 存是研究得最深、最成功的,这家胚胎库实质上是把这些研究带入实际应用阶段.但是,生殖 细胞的冷冻也存在许多未解决的问题,冻存技术本身尚在发展和完善;

科学家仍缺乏长期冻存 对其长久影响的数据.当然,此研究的前景是乐观的,相信随着冷冻技术、胚胎技术乃至生殖 生物技术的发展和完善,冷冻精子、卵和胚胎将进入实质性的应用和商业阶段.近年来发展起 来的辅助性生殖技术,如透明带下精子注射技术(subzona insemination)和卵质内精子注射 技术(intracytoplamic sperm injection) (Catt 等1995;

Kazem 等1995)将有力地推 动这一趋势. 13.1.2.1 鱼类精液的冻存 到目前为止,已有

50 多种淡水鱼和咸水鱼的精液冻存的报道.几种常用的、具有代表性的 防冻液和稀释液见表 13-2.降温方法包括液氮蒸气降温冷冻、干冰滴冻及程控降温等.液氮蒸 气降温致冻当然最为方便,但也最难控制.因为液氮蒸气的密度、样品的大小和数量、样品悬 置的高度、液氮罐的形状和室温高低都会影响降温速率. 第13 章 生殖生物技术在动物迁地保护中的应用

145 表13-2 几种主要鱼类的防冻液配方 鱼类精液的冷冻及复苏方法如下: (1)在精液中加适量的稀释液和防冻液, 使精子浓度为