PDF《Hieff MutTM》

上海翊圣生物科技有限公司 客服热线:400-6111-883 E-mail: order@yeasen.

com 上海翊圣生物科技有限公司 客服热线:400-6111-883 E-mail: order@yeasen.com HB180819 Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit Cat No.

11003 产品说明书 本产品仅作科研用途! 上海翊圣生物科技有限公司 客服热线:400-6111-883 E-mail: order@yeasen.com

网址:www.yeasen.com 第1页,共8页产品信息 产品名称 货号 规格 储存 Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit 定点突变试剂盒 11003ES10

10 T -20℃ 产品描述 Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit是基于Hieff CloneTM 快速克隆技术的定点突变系统.使用本试剂盒,目标质粒 扩增产物经DpnI消化、Hieff CloneTM 重组环化后直接进行转化即可完成定点突变.该试剂盒由两个模块组成:Hieff? II Pfu DNA Polymerase扩增模块和Hieff Clone? 快速克隆模块.Hieff? II Pfu DNA Polymerase超高的保真度显著降低了扩增过程中引 入新突变的可能性,其卓越的长片段扩增能力,广泛适用于长度小于20 kb的任何质粒扩增.Hieff Clone? 快速克隆系统利用 高效的同源重组反应替代传统的退火成环反应.因此使用Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit进行DNA定点突变时,引 物设计更加灵活,且扩增反应不再需要以线性方式进行,极大减少了模板使用量,有利于原始甲基化模板的彻底降解.Hieff Clone? 技术可以高效完成两个PCR产物的无缝拼接, 因此该试剂盒还能以单次扩增的方式对目标质粒上不连续的两个位点同 时进行突变. Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit中的重组酶Exnase经过优化, 专门针对单碱基、 不连续双碱基定点突变. 此外, 如扩增产物特异,其DpnI消化产物可不进行DNA纯化而直接用于重组反应.高度优化的反应缓冲液、快捷的操作流程以及 极高的成功率,使得Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit成为DNA定点突变首选试剂盒. 应用范围 DNA 定点突变 【注】 :如使用本品对质粒进行定点突变,请使用甲基化酶无缺陷的宿主菌 (例如Top

10、DH5α、JM109)扩增原始质粒! 产品组成 编号 组分 产品编号/规格 11003ES10 (10 T) 11003-A 2* Hieff? II PCR buffer

500 μl 11003-B dNTP Mix (10 mM each)

20 μl 11003-C Hieff? II Pfu DNA Polymerase (1 U/μl)

20 μl 11003-D Dpn I (10 U/μl)

20 μl 11003-E 2* Hieff Clone? Enzyme Premix

100 μl 运输与保存方法 冰袋(wet ice)运输.产品-20℃保存.有效期

1 年. 上海翊圣生物科技有限公司 客服热线:400-6111-883 E-mail: order@yeasen.com

网址:www.yeasen.com 第2页,共8页单碱基(或连续多碱基)定点突变实验方案 实验流程概览(图一) 图一:使用 Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit 进行单碱基(或连续多碱基)定点突变实验流程 1. 引物设计 向质粒引入单碱基或连续多碱基定点突变,只需设计一对引物将质粒进行反向PCR扩增即可.引物设计基本原则为:正 反向扩增引物5'

端包含15-21 bp反向互补区域(GC含量40%-60%为佳) ,各引物非互补区域长度至少为15 bp(待突变位点 至引物3'

端区域Tm值高于60℃为佳) .所需引入突变可以包含在互补区域内 (需要两条引物上均引入点突变),也可以包含 在任一条引物的非互补区域 (只需在一条引物上引入点突变),请勿将突变位点置于引物末端.以向pUC18引入单碱基突变 为例,引物设计具体方案如图二所示. Reverse Primer 设计部分反向互补的引物;