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iClick? EU Andy Fluor

488 Imaging Kit ――EU 法细胞增殖(细胞成像)检测试剂盒 产品货号 包装规格 A009

250 次 储存条件:-20℃,避光保存.

激发/发射波长: Andy Fluor

488 azide: 495/520 nm;

Hoechst 33342: 350/461 nm. 产品说明书 GeneCopoeia, Inc. 广州易锦生物技术有限公司 广州高新技术产业开发区广州科学城 掬泉路

3 号广州国际企业孵化器 F 区8楼邮编:510663

电话:4006-020-200

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网址:www.abpbio.com www.igenebio.com ?

2016 GeneCopoeia, Inc. iClick? EU Andy Fluor

488 Imaging Kit 使用说明书

2 iClick? EU Andy Fluor

488 Imaging Kit 产品货号: A009 试剂盒组份: 组份 试剂名称 包装 浓度 储存条件 组份 A EU

500 ?l

100 mM in DMSO -20℃ 组份 B Andy Fluor

488 azide

100 ?l NA -20℃,避光保存 组份 C iClick EU reaction buffer

50 ml 1* 2~8℃ 组份 D CuSO4

1 ml

10 mM in H2O -20℃ 组份 E iClick EU buffer additive

200 mg NA -20℃ 组份 F Hoechst

33342 70 ?l

5 mg/ml in H2O -20℃ 注:按照推荐的储存条件保存有效期为

1 年,请注意避免反复冻融. 产品介绍 直接测定 RNA 合成及 RNA 水平的变化是测定物质毒性、评估药物安全评价、细胞 健康的基本方法.EU 法细胞增殖(细胞成像)检测试剂盒采用一种尿嘧啶核苷类 似物-EU(5-乙炔基-尿嘧啶核苷),能够在 RNA 转录时期代替尿嘧啶(U)掺入正 在合成的 RNA 分子, 利用 EU 与染料之间的点击化学(Click Chemistry)反应可以在 体内和体外水平检测时间和空间上 RNA 合成的变化,能够更方便地研究 RNA 转录 位点,结合相关抗体标记能够检测与 RNA 有相互作用的蛋白.结合 EdU 和EU 进 行检测新合成的 DNA 和新合成的 RNA,可以深入开展细胞增殖、细胞周期、细胞 毒性、DNA 复制及修复、信号通路等方面的研究. 注意事项 ? 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭. ? 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作. 实验所需耗材(不包含在试剂盒中) ? 1*PBS(pH 7.2~7.6) ? 细胞固定液(含3.7%甲醛的 PBS) ? 细胞透膜液(含0.5% Triton? X-100 的PBS) ? 含3% BSA 的PBS(pH 7.4) ? 去离子水 ? 18*18 mm 盖玻片 iClick? EU Andy Fluor

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3 EU 法细胞增殖(细胞成像)检测实验流程 实验步骤 1. EU 标记 注意:EU 标记的最佳浓度根据细胞类型而变化.建议使用 EU 的起始浓度为

100 μM.细胞培 养基,细胞浓度,细胞类型及其它因素都可能影响标记 EU 标记效率.所以,在进行初始实验 时,要先根据自身的细胞类型和实验条件,选用几组不同的 EU 浓度来确定最佳的 EU 浓度. 1.1 以合适的细胞浓度,将细胞铺到盖玻片上,将细胞培养过夜至正常生长阶段. 1.2 (可选)对细胞按实验设计进行处理. 1.3 制备 2*EU 工作液.用细胞培养基按一定比例稀释 EU 溶液(组份 A).建 议使用

100 μM EU 初始浓度. 1.4 预热 2*EU 工作液到 37℃, 往含培养基的细胞中加入等体积的 2*EU 工作液. 例如实验选用 EU 的终浓度为

100 μM,配置

200 μM EU 工作液并用

200 μM EU 工作液取代一半的细胞培养基.我们不建议去除所有的细胞培养基,然后加入 1* EU 工作液.因为这样操作会影响细胞正常生长. 1.5 根据细胞类型孵育一段时间,最佳孵育时间与细胞周期相关,大多数肿瘤细胞 细胞铺板 可选:处理细胞样品 EU 孵育细胞 固定、透膜细胞 EU 检测 可选:抗体或其他染料细胞染色 图像获取及分析 iClick? EU Andy Fluor