PDF《司法鉴定》

2 3.4 安德森参考序列 Anderson reference sequence, ARS 安德森于

1981 年在英国剑桥 Sanger 实验室首次完成测定的人类线粒体 DNA 序列,GenBank 登录 号:M63933. 注1:也被称为剑桥参考序列(cambridge reference sequence,CRS). 注2:1999 年, 安德鲁斯等人对剑桥参考序列所用的样本进行了重新测序, 修正了最初公布序列中的

11 个碱基序列. 修订的剑桥参考序列(revised cambridge reference sequence,rCRS)是目前法庭科学公认的标准参考序列 (GenBank 登录号:NC_012920.1).

4 基本要求 4.1 鉴定机构应具有从事法医物证的执业范围,且应满足如下要求: a) 定期参加能力验证相关计划并考核合格;

b) 对所有影响鉴定结果的人员岗位规定相应的能力要求,包括教育、资质、培训、专业知识、技 能等,并保留相关记录;

制定适宜的培训计划并组织实施;

c) 依据鉴定方法和要求对鉴定人以及参与鉴定工作的人员进行监督, 以评价其鉴定工作的符合性 和满意程度;

监督的结果应作为培训需求评价的依据之一;

d) 具有能识别样本的标识系统,并确保样本在鉴定过程期间能得到持续的识别;

e) 建立样本的运输、接收、处置、保护、存储、保留和/或清理的规定,应对接收、内部传递、 处置、保留、返还和清理等过程进行记录,确保记录的完整性和可追溯性. 4.2 鉴定人应具有法医物证鉴定执业资格,熟悉并掌握线粒体 DNA 检验的方法和原理,并能正确评 价结果. 4.3 鉴定活动应包括检验(采样、DNA 提取和纯化、DNA 定量分析、mtDNA 测序)、结果比对与解 释、鉴定意见判断、鉴定文书撰写等环节.鉴定活动完毕后,应将各个环节的记录进行归档.

5 检验程序 5.1 采样要求 5.1.1 毛根、毛干、指甲、陈旧骨骼、牙、核DNA 检测失败的血痕、组织等生物检材均可考虑检测 mtDNA.进行同一母系关系比对时,尽量采集同一种类型的生物检材. 5.1.2 样本应分别包装,注明被鉴定人姓名、编号、采样日期等. 5.1.3 样本采集后应冷藏或冷冻保存. 5.1.4 采样单须在案件鉴定完毕后同其他原始技术记录一并存入档案. 5.2 DNA 提取和纯化 按照GA/T 383-2014中附录A的方法执行. 5.3 DNA 定量分析 按照GA/T 383-2014中6.1~6.3的方法执行. SF/Z JD0105008――2018

3 5.4 mtDNA 测序 5.4.1 mtDNA 高变区测序 可选择商品化mtDNA测序试剂盒(或自行针对HVR区域设计的体系)进行PCR扩增和测序. 本规范提供了一个自行针对HVR区域设计的体系示例,操作如下: a) PCR 扩增 PCR 扩增体系:包含

5 μL 10*PCR Buffer、5 μL

25 mmol/L MgCl

2、2 μL

10 mmol/L dNTP、10 μL 2.5 μmol/L 引物对、0.4 μL Golden Taq 酶及 1-5 ng DNA,去离子水补足至

50 μL. HVR-I 引物对: L16047: 5'

-CAT GGG GAA GCA GAT TTG-3'

H16464: 5'

-TTA GCT ACC CCC AAG TGT-3'

HVR-II 引物对: L29: 5'

-GGT CTA TCA CCC TAT TAA CCA C-3'

H408:5'

-CTG TTAAAA CTG CAT ACC GCC A-3'

PCR 扩增条件:94℃,11 min;

94℃

30 s,55℃

60 s,72℃

90 s,35 个循环;

72℃,7 min. 注:本示例中 HVR-I 区域与 HVR-II 区域采用相同的 PC........