PDF《季晓辉》

7 一≯j 第l0卷 第 3期 .

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9 5 年9月中国病毒学V1 ROLOGI CA Sl NI CA

0 7 / Vo1 .

1 0,No.

3 Scp..

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5 人单核细胞 系U. . 和T细胞系 HS B z 细胞 的HS V一1感染 季晓辉 姚拽/ 李焕娣 周瑶玺 ・

7 ― ― / 一V7f(南京医科大学微生物学教研室.南京210029)2. 厂/,,

^厂1提要用HS V一1接种人单棱细 胞传代株 U , 和 T淋 巴细 胞传代株 H S B z 细胞,通过 对病毒漓度、细胞增 殖 与病变 、 病 毒抗 原表 达 及病 毒DN A 的动态 观察 . 研究了HSV一

1 感 染两 种细 胞 的特 点结果发 现 接种 病 毒后 , U g s z 细胞仅允黼 毒短时间低 漓 度复 制,培养 上清 中病 毒漓 度在l2天 内降 至测出水平 . 细胞经过 l ~2 周后增殖受抑、 死亡增多 , 然后叉逐渐恢复 I 用LPS持续辋澉则能提高 病 毒感 染漓凄 , 延 长感 染时 间.形成 短期j 持 续感 染.HS B z 细胞允许病毒 复制 至 较高 漓度,呈现 急性 十分清楚 , 可能 涉及神经途径或血循环途径 , 而在血 循环途径中最可能涉及的是单核 细胞和 淋 巴细胞 研究HS V

1 体外感染单核 细胞和淋 巴细胞的特点 , 有助于 阐明 HS V一1体内播 散的途 径我们在本 室过 去 B淋巴细胞 系HS V感 染研 究的基础上 , 通过 采用 人单核 细胞传代株 U 和人T 细胞传代株 HS B .细胞 , 进一步 研 究了 HS V一 1感染单 核 细胞和 T 淋 巴细 胞的特 点.材料与方 法1细胞培 养Uw 和HSBz细胞 引 自第四军 医大 学免 疫室,用l0新生牛 血清 的RpMI

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4 0营 养蔽 ( 各 氪酰 胺2mmo l / L. 青、链霉 素各|00U/ m1 ) . 于37℃5%COz 传 代培 养.2病毒HSV一

1 S M 株 .在原 代乳 兔肾( P R K) 细 胞单 层 中传代 , HS V一1感染 爰 其检 查3・lu删 H S B : 细胞 的感 染以HS V― l 接种生长良好 、 形态典型、未经或经含LPS( S ~ma )

2 g / ml / P HA( 广州 医药 工业 研 究所 )

2 0 g / m1 的 营养 液培 养 3天的 U. / H S B 细胞 , MoI 一1TC I D~ / 细胞.3

7 C吸附t小时 , 离心 , Ha n k 液洗{ 条 2次 , 除 去辨 离病 毒 .甩与 原先相 同 的营养 液重悬 细胞,调整浓 度至

1 0

5 午细 胞/ml . 每瓶5m1 分 瓶培 养.每4天换 蔽.定时在 换液 前取

2 ml 混 匀悬 液待 检,再补人

2 ml 营 养蔽 恢复 原体 积.3・2细胞 计数 I 漓待检样 车与l漓2台酚兰 染漉 混合,显微 镜下 计数细胞 浓 度和 死细胞(染成蓝 色)比倒 .

3 ・

3 细 胞增 殖情 况 的检 查取0.1mi 样本.以MT T 比色分 析法 测定Ⅲ .

3 ・

4 病毒漪度 将剩余样牟离心 , 取卜清~- -7 o c冻存备作病毒滴定 滴定采用微量 P R K 单层细胞病变法 , 车立 于1994年7I6H收 到.10片

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0 中国病毒学第10卷

5 0 螈驵织细 胞培 养感 染量 ( TC

1 D~ / m1 ) 表 示滴 度.计算按Reed―Mu c n c h方法 .

3 5 病 毒抗 原检 测 将剩 采 样本 沉 淀细胞 以PBS洗 涤 2次 、 涂片、 冷 丙酮 固定10分 钟 .采 用f吲妻荧光 试验 ( I F A) 检测细胞中病毒抗原 一抗为免抗 H S V一1lgG, 本室 自制 ;

二抗为荧光羊抗免 I g G( 军事医学科学院 ) 按 常规操作 最后 加0.I伊文思 兰复 染 1分钟 . 荧光 显 赣镜观察 . 明亮 的黄 绿 色细 胞为 阳性 , 红色细胞 为 阴性 . 每张复 片计 数200十 细胞 . 计 算平 均 荧光阳 性细 胞百分 率.3.6病毒 DNA检}昊j采用 多聚 酶链 匣应 ( P C R) 技术.弓『物选自HS V一1基区UL4 2区,由中科院 上 博生 物工 程研 究 中心台 成.上F游序 列为 ― AC G A CG AC G TC C GA C GGC G A一和~- GT G CT G GT G C TG GA C GA C AC 一3,.其特 异性 扩增片段 为278bpC.取 l 十待检 样本 经PBS洗 涤 的沉淀 细胞 以细胞 裂解 液加 蛋白酶K法m制 备待 检DNA 模扳.D NA扩增采用上 海复华公 司PCR试荆盒 . 按说 明操 作.待检DNA模 扳加