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BOSTER 博士德生物 Product Information 地址:武汉市光谷大道特一号国际企业中心聚贤楼 B 座5楼

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网址:www.boster.com.cn BOSTER 在/平/凡/中/创/造/奇/迹BOSTER ANNEXIN V-FITC /PI 凋亡试剂盒 使用说明书 产品编号:MK1028 包装规格:100ul(20 次实验)/250ul(50 次实验)/500ul(100 次实验) 保存条件:Annexin V-FITC 与PI 需4℃避光储存,一年有效,Binding Buffer,4℃储存. 保存期:一年 原理说明:正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的 内侧,但在早期凋亡细胞中,PS 会从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞 外环境中.Annexin-V(膜联蛋白-V)是一种分子量为 35-36KD 的Ca2+依赖性磷脂结 合蛋白, 能与 PS 高亲和力结合. 用荧光素 (FITC、 Alexa Fluor488 等) 标记的 Annexin-V 作为探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生;

碘化丙啶 (propidine iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚 期的细胞和死细胞,PI 能够透过细胞膜而将细胞核染红.因此将 Annexin-V 与PI 结 合使用,就可以检测出细胞群体中的早期凋亡细胞与晚期凋亡细胞. 试剂盒组分: 组分 MK1028-20 (20 次实验) MK1028-50 (50 次实验) MK1028-100 (100 次实验) Annexin V-FITC 100μL 250μL 500μL Propidium Iodide(PI) 100μL 250μL 500μL Binding Buffer 10mL 25mL 50mL BOSTER 博士德生物 Product Information 地址:武汉市光谷大道特一号国际企业中心聚贤楼 B 座5楼

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网址:www.boster.com.cn BOSTER 在/平/凡/中/创/造/奇/迹BOSTER 使用方法: 1. 悬浮细胞,2000rpm 离心 5min 收集细胞;

对于贴壁细胞,要用不含 EDTA 的胰酶 消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎,造成假阳性,过短, 细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,吸除胰酶消 化液,加入细胞培养液终止消化, ,2000rpm 离心 5min 收集细胞. 2. 4℃预冷 PBS,洗涤细胞

2 次(2000rpm x 5min),收集细胞 2~5*105 . 3. 离心弃上清,加入 500μL 结合缓冲液,轻轻吹打重悬细胞. 4. 加入 5μL Annexin V-FITC,轻轻吹打混匀,加入 5μL PI 轻轻吹打混匀,室温 避光孵育 5-15min.(PI 染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许, 可以在检测前

5 分钟加入 PI) 5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察.最好在 1h 内检测. 注意事项: 1. Annexin V-FITC 与PI 量微,请在使用前离心集液. 2. Annexin V-FITC 与PI 需低温避光储存. 3. PI 有毒,能透过皮肤进入体内,使用时注意必要防护. 4. 本试剂盒适用于细胞样本,不适用于组织检测. 5. 检测细胞不能固定. 实验参考: 凋亡诱导剂处理 JK 细胞,37℃,5%CO?培养4h,参照说明书操作,经流式细胞仪检 测结果如下: BOSTER 博士德生物 Product Information 地址:武汉市光谷大道特一号国际企业中心聚贤楼 B 座5楼

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网址:www.boster.com.cn BOSTER 在/平/凡/中/创/造/奇/迹BOSTER 处理前 :正常细胞占比较高,早期凋亡细胞与晚期凋亡细胞较少. (红色部分为正常细胞,蓝色为早期凋亡细胞,绿色为晚期凋亡细胞,品红为坏死 细胞 ) 处理后:正常细胞明显减少,早期凋亡细胞明显 增加 .