PDF《石蜡切片》

石蜡切片 提供给实验室的实验用品及每个小组的用量:

1、 器材 切片刀,切片机,恒温箱,温台,熔蜡炉,蜡杯,酒精灯,蜡铲,展片台,解剖刀,解剖针, 解剖剪,解剖盘,培养皿,吸管,镊子,单面刀片,台木,毛笔,洒精灯,包埋纸盒,染色 缸,盖玻片,载玻片,玻片盘,树胶,树胶瓶,显微镜,温度计,脸盆,水浴锅.

2、 试剂 卡诺氏固定液、FAA 固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、埃利希苏木精染液, 1%伊红酒精溶液,1%盐酸酒精溶液,甘油蛋白粘片剂,郝普特氏粘片剂,中性树胶.1%番红, 1%固绿, 1%过碘酸, Schiff 试剂, 0.5%偏重亚硫酸钠溶液, 醋酸酐-吡啶混合液, 0.5%~1% 淀粉糖化酶溶液.

3、 材料 鼠肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织、大豆或小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆的根、茎、叶等.

4、 每个实验小组的用量

(一)器材 切片机,切片刀,温台,恒温箱,熔蜡炉,水浴锅等这类几个小组用一台就行;

解剖刀,单 面刀片,小台木,毛笔一只,蜡铲一个,盖玻片和载玻片

30 个,脸盆一个,酒精灯各一个, 包埋纸盒 2~3 个,染色缸一个,瓷杯

3 个,显微镜一台.

(二)试剂 FAA 固定液 50ml、1%番红 100ml、1%固绿 100ml、1%过碘酸 100ml、Schiff 试剂 100ml、 亚硫酸盐 300ml、醋酸酐-吡啶混合液 100ml、0.5%~1%淀粉糖化酶溶液 200ml,石蜡半盒、 蜂蜡

10 块、埃利希苏木精染液 100ml、1%伊红酒精溶液 100ml、1%盐酸酒精溶液 100ml、 95%酒精

5 瓶、二甲苯

2 瓶,甘油蛋白粘片剂数滴,中性树胶数滴.

(三)材料 小白鼠一只、蚕豆种,小麦和大豆种 10~20 粒,洋葱和大蒜由实验室统一种,然后取其所需 部分. 石蜡切片法实例

(一) ―苏木精-伊红对染法

一、目的要求

1、 熟悉石蜡切片的制作过程.

2、 掌握 HE 染色的基本原理和染色方法.

二、实验原理 石蜡切片是最基本的切片技术,冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来 的.苏木素与伊红对比染色法(简称 H.E.对染法)是组织切片最常用的染色方法.这种 方法适用范围广泛,对组织细胞的各种成分都可着色,便于全面观察组织构造,而且适 用于各种固定液固定的材料,染色后不易褪色可长期保存.经过 HE 染色,细胞核被苏 木素染成蓝紫色,细胞质被伊红染色呈粉红色.

三、实验用品

(一) 器材 切片机,切片刀,温台,恒温箱,解剖刀,镊子,剪刀,解剖针,单面刀片,小台木, 洒精灯,包埋纸盒,染色缸,烧杯,水盆,熔蜡炉,蜡杯.

(二) 试剂 卡诺(Carnoy)固定液,埃利希苏木精染液,1%伊红酒精溶液,1%盐酸乙醇液,各级 酒精(30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%),二甲苯,甘油蛋白粘片剂, 中性树胶. 试剂配法:

1、卡诺氏固定液: 100%酒精

3 份 冰醋酸

1 份或:100%酒精

6 份 氯仿

3 份 冰醋酸

1 份

2、埃利希苏木精染液的配法: 苏木精 1g 纯酒精 50ml 冰醋酸

5 ml 甘油

50 ml 钾矾(硫酸铝钾)约5g(饱和量) 蒸馏水

50 ml 配法: 、将苏木精溶于约

15 ml 的纯酒精中,再加冰醋酸后搅拌. 、当苏木精溶解后即将甘油倒入并摇动容器,同时加入其余的酒精. 、将钾矾在研钵中研碎并加热,然后将它溶解于水中. 、将温热的钾矾溶液一滴一滴地加入上述染液中,并随时搅动. 、此液混合完毕,将瓶口用一层纱布包着小块棉花塞起来,放在暗处通风的地方,并经常 摇动以促进它的成熟.成熟时间约 3~4 周.若加入 0.2g 碘酸钠,可立刻成熟.此液稳定而 染色均匀,染核效果良好,不会发生沉淀,长期贮备无妨.此液可分别与伊红等进行二重染 色.

3、1%伊红酒精溶液: 伊红 1g 溶于

100 ml95%酒精溶液.

4、1%盐酸乙醇液 盐酸

1 份70%酒精

100 份

5、甘油蛋白贴片剂: 蛋白

50 ml 甘油

50 ml 水杨酸钠(防腐剂) 1g 配制时将鸡蛋一个打破入碗或杯中,去蛋黄留下蛋白,用玻棒调打成雪花状泡沫,然后 用粗纸或双层纱布过滤到量筒中,经数小时或一夜,即可滤出透明蛋白液.此时在其中再加 等量的甘油,稍稍振摇使两者混合.最后加入防腐剂(水杨酸钠)作防腐用.可保存几个月.

(三) 材料 鼠肝

三、实验程序

1、 取材 颈椎脱臼法处死小鼠,打开腹腔,剪取肝组织(或小肠).切取的组织块不宜太大,以 便固定剂穿透,通常以 5mm*5mm*2mm 或10 mm*10 mm*2 mm 为宜.取下所需要的 肝组织,切成一小块 2~3mm 厚. 取材的注意事项: (1)取材动作要迅速,不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化. (2)切片材料应根据需要观察的部位进行选择,尽可能不要损伤所需要的部分.

2、固定 将切好的肝组织用生理盐水组织洗一下,立即投入卡诺固定液中固定,固定 30~50min. 固定的注意事项: (1)一般固定液,都以新配为好,配好后应贮存在阴凉处,不宜放在日光下,以免引起化 学变化,失去固定作用. (2)有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用,一定要在使用前才混合,如果混合 太早,固定时就没有作用了. (3)固定材料时,固定液必须充足,一般为材料块的 20~30 倍,有些水分多的材料,中间 应更换 1~2 次新液. (4)材料固定完毕后,保存于严密紧塞或加盖的容器里,同时在容器外上标签,并随同材 料在溶液中投入相应的标签,以免相互混淆.标签上注明固定液、材料来源、日期等.标签 上的文字,应用黑色铅笔或绘图黑墨水书写.

1、 洗涤 材料经固定后,除乙醇外,组织中的固定液必须冲洗干净,尤其是含有重金属的固定液. 因为残留在组织中的固定液,有的不利于染色,有的产生沉淀或结晶影响观察.冲洗方法根 据固定液的性质而定,固定液为水溶液的常用水洗涤,固定液含有乙醇的则用 50%~70%乙 醇冲洗.

2、 脱水 30%、50%、70%、80%、90%各级乙醇溶液脱水各 40min,放入 95%、100%各两面 三刀次,每次 20min.各种材料经固定与洗涤后,组织中含有大量水分,由于水与石蜡不能 互溶,所以必须将组织中的水分除去. 脱水注意事项 (1)脱水必须在有盖的玻璃品中进行,防止吸收空气中的水分. (2)在更换高一级的脱水剂时,最好不要移动材料以免损坏,可用吸管吸出器皿中的脱水 剂,再用吸水吸尽器皿内剩余液,然后于皿中加入高一级脱水剂. (3)在低浓度或纯酒精中,每级停留不宜太长,否则易使组织变软,助长材料的解体. (4)在高浓度或纯酒精中,每级停留的时间也不宜太长,否则会使组织变脆,影响切片. (5)如需过夜,应停留在 70%酒精中. (6)脱水必须彻底,否则不易透明,甚至使透明剂内出现白色混浊现象

5、透明 纯酒精、二甲苯等量混合液 15min,二甲苯 0.5h(或至透明为止),须换一次二甲苯. 由于乙醇与石蜡不相溶,而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蜡,所以脱水后还要经过二甲苯 以过渡.当组织中全部被二甲苯占有时,光线可以透过,组织呈现出不同程度的透明状态. 透明注意事项 (1)使用透明剂时,要随时盖紧盖子,以免空气中的水分进入. (2)更换每级透明剂,动作要迅速,一方面为了不使材料块干涸,另一方面能避免吸收湿 气. (3)在透明过程中, 如果材料周围出现白色雾状,说明材料中的水未被脱净,应退回纯酒 精中重新脱水,然后再透明.

6、透蜡 放入二甲苯和石蜡各半的混合液 15min,再放入石蜡Ⅰ、石蜡Ⅱ透蜡各 20~30 分钟. 透蜡的目的是除去组织中的透明剂(如二甲苯等),使石蜡渗透到组织内部达到饱和程度以 便包埋.透蜡时间根据组织的透蜡时间较长,约需 1~2d.透蜡应在恒温箱内进行,并保持 箱内温度在 55~60℃左右,注意温度不要过高,以免组织发脆.置于恒温箱 0.5h. 透蜡注意事项 (1)尽........