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网址:www.yeasen.com 第1页,共2页HB180329 HifairTM Ⅲ One Step RT-qPCR Probe Kit 产品信息 产品名称 产品编号 规格 储存 HifairTM Ⅲ One Step RT-qPCR Probe Kit 11145ES50

50 T -20℃避光保存 HifairTM Ⅲ One Step RT-qPCR Probe Kit 11145ES70

200 T -20℃避光保存 产品描述 HifairTM Ⅲ One Step qRT-PCR Probe Kit 是以 RNA 为模板进行定量 PCR 反应的试剂盒. 在实验的过程中, 逆转录和定量 PCR 在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险.本试剂盒以 RNA 为模板,使用基因特异性引物,利用耐 热HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase 高效合成第一链 cDNA,并搭配使用探针和 UNICONTM HotStart Taq DNA Polymerase,配 合优化的缓冲体系能够特异灵敏的对 RNA 模板进行精确定量. 本试剂盒以预混的 Mix 形式提供, 2* HifairTM Ⅲ P buffer 包含优化的缓冲体系和 dNTPs 等, 优化了有效抑制非特异性 PCR 扩增的因子和提升 PCR 反应扩增效率的因子,适用于荧光标记探针的高特异性检测系统.此外,HifairTM UH Ⅲ Enzymes 包 含比例优化的 HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase、RNase inhibitor 及UNICONTM HotStart Taq DNA Polymerase 等. 产品组分 组分编号 组分名称 产品编号/规格 11145ES50 (50 T) 11145ES70 (200 T) 11145-A 2* HifairTM Ⅲ P buffer

500 μL

1 mL*

2 11145-B HifairTM UH Ⅲ Enzymes

50 μL

200 μL 11145-C HieffTM 50* High Rox

20 μL

80 μL 11145-D HieffTM 50* Low Rox

20 μL

80 μL 11145-E RNase free ddH2O

500 μL

1 mL*

2 【注】P buffer 为Probe buffer 的简写,UH 为UNICON-Hifair 的简写. 适用机型 High Rox 适用机型: ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne?, StepOne Plus? Low Rox 适用机型: ABI 7500,

7500 Fast, ViiA?7, QuantStudio?

3 and 5, QuantStudio? 6,7,12k Flex Stratagene MX3000P?, MX3005P?, MX4000P? 不需要 Rox 校正的仪器型号: Bio-Rad CFX96?, CFX384?, iCycler iQ?, iQ?5, MyiQ?, MiniOpticon?, Opticon? , Opticon? 2, Chromo4? Eppendorf Mastercycler? ep realplex, realplex

2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene? Q, Rotor-Gene? 3000, Rotor-Gene?

6000 Roche Applied Science LightCycler? 480, LightCycler? 2.0;

Lightcycler?

96 Thermo Scientific PikoReal Cycler;

Cepheid SmartCycler? ;

Illumina Eco qPCR 运输与保存方式 冰袋运输.-20℃避光保存,有效期

1 年.本品避免反复冻融.建议分装保存. 注意事项 1. 实验过程中请使用 RNase free 耗材. 2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作. 上海翊圣生物科技有限公司 客服热线:400-6111-883 E-mail: order@yeasen.com 本产品仅作科研用途! 第2页,共2页反应体系(以20 μL 为例) 组分 加入量 终浓度 2* HifairTM Ⅲ P buffer

10 μL 1* HifairTM UH Ⅲ Enzymes

1 μL - HieffTM 50* High Rox or Low Rox 0.4 μL - Gene Specific Primer Forward (10 ? M) 0.4 μL 0.2 μM Gene Specific Primer Reverse (10 ? M) 0.4 μL 0.2 μM TaqMan Probe (10 ? M) 0.2 μL 0.1 μM 模板 RNA Total RNA:

1 pg-1 ? g - RNase free ddH2O to

20 μL - 【注】:a) 所有试剂使用前应充分混匀. b) 参比染料:Rox 的添加,可根据不同仪器型号进行选择,具体可参考【适用机型】 . c) 引物浓度:通常引物终浓度为 0.2 μM,也可以根据情况在 0.1-1.0 μM 之间进行调整. d) 探针浓度:探针终浓度可在

50 nM-250 nM 之间调整. e) 体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;

推荐使用带滤芯的枪头.避免交叉污 染和气溶胶污染. f) 模板稀释:一步法 qRT-PCR 灵敏度极高,推荐将模板稀释后(如稀释至 2-5 μL/样本)加入反应体系中,这样可以有 效提高实验的重复性. g) 反应体系:建议以大体系进行实验,如20 μL 或50 μL. 标准扩增程序 反应阶段 温度 时间 循环数

1 逆转录 50℃a

15 minb

1 2 预变性 95℃

30 sec

1 3 扩增反应 95℃

10 sec

45 cycles 60℃

30 secc 【注】 a) 对于含复杂二级结构或高 GC 含量的 RNA 模板,可将逆转录温度提高到 55℃,有助于提升扩增效率和灵敏度. b) 逆转录时间可以根据模板的复杂程度进行调整,时间为 5min 时可满足大多数基因的鉴定. c) 不同的 qPCR 检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置.