DOC《附件1》

附件1 2018年动物源细菌耐药性监测任务承担单位及监测数量汇总表 检测单位 样品来源 养殖场要求 采样部位 细菌种类与数量要求 中国兽医药品监察所 安徽、广西 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为鸡、猪源样品.

泄殖腔拭子或动物盲肠 沙门氏菌≥50株,弯曲杆菌≥50株 辽宁兽药饲料畜产品质量安全检测中心 辽宁、内蒙 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为鸡、猪源样品. 泄殖腔拭子或动物盲肠,牛奶 大肠杆菌≥200株,肠球菌≥200株,沙门氏菌或金葡菌≥50株 上海兽药饲料检测所 上海、江苏 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为鸡、猪源样品. 泄殖腔拭子或动物盲肠,牛奶 大肠杆菌≥200株,肠球菌≥200株,沙门氏菌或金葡菌≥50株 四川省兽药监察所 四川、云南 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为鸡、猪源样品. 泄殖腔拭子或动物盲肠,牛奶 大肠杆菌≥200株,肠球菌≥200株,沙门氏菌或金葡菌≥50株 广东省农产品质量安全中心 广东、海南 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为鸡、猪源样品. 泄殖腔拭子或动物盲肠,牛奶 大肠杆菌≥200株,肠球菌≥200株,沙门氏菌或金葡菌≥50株 中国动物卫生与流行病学中心 黑龙江、吉林 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为鸡、猪源样品. 泄殖腔拭子或动物盲肠,牛奶 大肠杆菌≥200株,肠球菌≥200株,沙门氏菌≥50株,金葡菌≥50株,弯曲杆菌≥50株 中国动物疫病预防控制中心 天津、青海 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为鸡、猪源样品. 泄殖腔拭子或动物盲肠,牛奶 大肠杆菌≥200株,肠球菌≥200株,沙门氏菌或金葡菌≥50株,弯曲杆菌≥50株 河南省兽药饲料监察所 河南、甘肃 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为鸡、猪源样品. 泄殖腔拭子或动物盲肠,牛奶 大肠杆菌≥200株,肠球菌≥200株,沙门氏菌或金葡菌≥50株 湖南省兽药饲料监察所 湖南、贵州 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为鸡、猪源样品. 泄殖腔拭子或动物盲肠,牛奶 大肠杆菌≥200株,肠球菌≥200株,沙门氏菌或金葡菌≥50株 陕西省兽药监测所 陕西、宁夏 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为鸡、猪源样品. 泄殖腔拭子或动物盲肠,牛奶 大肠杆菌≥200株,肠球菌≥200株,沙门氏菌或金葡菌≥50株 山东省农业科学院 山东、山西 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为鸡、鸭、猪源样品. 泄殖腔拭子或动物盲肠,牛奶 沙门氏菌或金葡菌≥100株,弯曲杆菌≥100株 浙江省农业科学院 浙江、福建 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为鸡、鸭、猪源样品. 泄殖腔拭子或动物盲肠,牛奶 沙门氏菌或金葡菌≥100株,弯曲杆菌≥100株 中国农业大学 至少包括北京和山西,其它不限 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为肉鸡和猪源样品. 动物肠道或拭子 魏氏梭菌≥200株 华南农业大学 至少包括所在地和邻近一个省份,其它不限 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为肉鸡和猪源样品. 动物肠道或拭子 魏氏梭菌≥200株 华中农业大学 至少包括湖北和邻近一个省份,其它不限 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为肉鸡和猪源样品. 动物肠道或拭子,鼻拭子 魏氏梭菌≥100株,副猪嗜血杆菌≥30株 西北农林科技大学 至少包括青海、宁夏,其它不限 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为羊源样品. 动物肠道或拭子、体表淋巴结 大肠杆菌≥100株,伪结核棒状杆菌≥100株,魏氏梭菌≥100株 北京市兽药监察所 北京 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为鸡、猪源样品. 泄殖腔拭子或动物盲肠 大肠杆菌≥200株,肠球菌≥200株 江西省兽药饲料监察所 江西 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为鸡、猪源样品. 泄殖腔拭子或动物盲肠,牛奶 大肠杆菌≥200株,肠球菌≥200株 江苏省畜产品质量检验测试中心 江苏 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为鸡、猪源样品. 泄殖腔拭子或动物盲肠,牛奶 大肠杆菌≥200株 江苏省家禽科学研究所 江苏 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为鸡、猪源样品. 泄殖腔拭子或动物盲肠,牛奶 弯曲杆菌≥100株 河北省兽药监察所 河北 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为鸡、猪源样品. 泄殖腔拭子或动物盲肠,牛奶 大肠杆菌≥200株,肠球菌≥200株 重庆市兽药监察所 重庆 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为鸡、猪源样品. 泄殖腔拭子或动物盲肠,牛奶 大肠杆菌≥200株,肠球菌≥200株 新疆维吾尔自治区兽药饲料监察所 新疆 养殖场或屠宰厂共10-20个 屠宰厂为鸡、猪源样品. 泄殖腔拭子或动物盲肠,牛奶 大肠杆菌≥200株,肠球菌≥200株注:采样时,大、中小型养殖场各半;

主要采育成动物、鲜牛奶;

分离大肠杆菌或肠球菌每个养殖场采样30~50份,分离其他细菌根据分离率来确定样品数量.屠宰厂采样时,应采集动物的直肠或盲肠样品. 附件2 2018年动物源细菌耐药性监测采样 和监测技术要点

一、采样安排

(一)采样地点选择 各监测任务承担单位按照《监测计划》进行选场、采样和分离细菌.同时,负责对本辖区内设立的全国定点监测场(见下表)长期跟踪监测大肠杆菌和肠球菌耐药性变化趋势,每年采样2次,分上半年和下半年进行. 全国长期定点跟踪监测养殖场名录 地区 养殖场 上海 上海市崇明区慧岛养猪场、上海市崇明区瀛跃种禽场、上海市松江区太平洋家禽育种有限公司 辽宁 海城市世福种猪有限公司,锦州双八乳业宋家沟奶站 广东 江门盈康猪场,江门春茂畜牧有限公司(鸡场),广东陈召坤鸡场 四川 成都巨星农牧科技有限公司(猪场),遂宁市金绿农牧科技有限公司(猪场)、巨星崇州种鸡场(鸡)、四川新希望奶牛养殖有限公司 江西 江西南昌国泰养猪场,江西南昌明泰养鸡场(蛋鸡场) 湖南 湖南新五丰股份有限公司永安分公司、湖南湘佳牧业股份有限公司,宁乡广东温氏畜禽有限公司、湖南省金健乳第一牧场 山东 山东银宝养猪场,山东中慧养鸡场,益客养鸭场,维多利亚奶牛场 陕西 陕西省富平县海燕羊场,陕西省泾阳县晨辰奶牛养殖厂,陕西省西安市长安区东大南强养猪场,陕西省西安市长安区东大北强养鸡场 河南 河南益生源农牧发展有限公司(鸡),富源养殖专业有限公司(猪),洋江奶牛养殖专业合作社(牛) 北京 北京华都峪口禽业有限公司,北京顺鑫农业小店畜禽良种场 江苏 江苏常州市永康农牧猪场、江苏常州市红旗养鸡场、江苏常州市龙盛养鸡场 河北 石家庄旭晨养殖合作社(肉鸡),石家庄宝丰种鸡养殖场(蛋鸡),石家庄顺达养猪场(猪) 重庆 重庆鑫伟旭生态农业发展有限公司(鸡场),重庆市六九畜牧科技股份有限公司(猪场) 浙江 浙江宝仔农业发展有限公司(猪场)、浙江嘉兴三园鸡专业合作社(鸡场)、浙江绍兴董家竹山鸡场(鸡场)、杭州海青养殖有限公司(鸭场)、建德市三弟兄农业开发有限公司(鸡、鸭、猪屠宰场) 新疆 新疆天康种猪场,新疆阜康市泰昆养殖有限公司(鸡场),新疆呼图壁种牛场有限公司畜牧二场(牛) 天津 天津市精武种猪场(猪场),天津广源畜禽养殖有限公司第一分公司(蛋鸡),天津市武清区昭君肉鸡养殖专业合作社(肉鸡) 湖北 仙桃市神康生态牧业有限公司(猪),仙桃市天利养鸡专业合作社(鸡) 海南 海南传味文昌鸡产业股份有限公司(鸡场),海南丽康农业综合开发有限公司三江种猪场(猪场),海南艾森牧业有限公司(奶牛场) 安徽 嘉吉动物蛋白(安徽)有限公司,安徽禹王养殖有限公司 内蒙 新农村奶牛养殖合作社(牛),赤峰市农研院鸡猪服务部(鸡、猪) 黑龙江 齐齐哈尔市鑫兴养殖场(猪),齐齐哈尔市宏伟养殖场(肉鸡), 齐齐哈尔市新未来奶牛养殖场(牛) 云南 云南曲靖市龙源农牧科技发展有限公司(猪),昆明石林县骏杰养殖场(蛋鸡),昆明市石林县龙井山养鸡专业合作社(肉鸡) 福建 南阳实业有限公司(猪场)、周宁县生态林养殖专业合作社(鸡场) 山西 山西汾阳市荣璋猪业科技公司,山西张振国养殖场(鸡场),山西太原旺禅源牧业公司 青海 西宁市大通县录明养殖专业合作社(蛋鸡场),海东市乐都区达佑养殖有限公司(肉鸡场),海东市平安区金阳富硒良种猪有限公司(猪场) 宁夏 宁夏灵武市汇聚融农牧专业合作社、宁夏银川市贺兰县立岗养猪场(猪)、宁夏银川市贺兰县荣鑫蛋鸡养殖场(鸡)、宁夏灵武市华兴禽养殖有限公司 贵州 贵州都匀黔隆果菜基地开发有限公司、贵州息烽特驱家禽养殖有限公司、贵州都匀开发区天羽蛋鸡养殖场(鸡) 广西 南宁诚兴科技有限公司(蛋鸡),南宁隆安凤鸣农牧有限公司(肉鸡),广西雄桂种猪有限公司(猪) 吉林 同济牧业有限公司(猪)、龙潭万福养殖场(肉鸡)、 吉林春光牧工商集团公司(牛)

(二)采样类型 病死动物采集临床病料;

健康动物采集泄殖腔或盲肠拭子作大肠杆菌、肠球菌、沙门氏菌和弯曲杆菌分离;

采集新鲜牛奶作金黄色葡萄球菌分离,根据养殖场规模,每个场采样30~50份.

(三)监测的细菌种类 包括大肠杆菌、肠球菌(分为屎肠球菌和粪肠球菌)、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、弯曲杆菌(分为空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌)等.沙门氏菌和金黄色葡萄球菌可根据各地分离情况进行监测.

二、调查和记录 各监测任务承担单位要认真做好饲料和饲料药物添加剂来源与种类调查、采样前动物使用抗菌药物情况调查(预防用药和治疗用药)和采集样品的统计,据实填写采样记录表.

三、细菌分离与鉴定 采用选择性培养基,定向做大肠杆菌、肠球菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和弯曲杆菌分离,用生化试验、PCR技术或血清学方法对分离物进行鉴定.本年度分离监测的细菌种类与数量要求见《监测计划》.分离到的菌株在-20℃以下加甘油保护剂冷冻保存或用其它合适方法自行保存,沙门氏菌和弯曲杆菌送中监所进行血清型鉴定后保存.

四、药物敏感性测定 用经中监所质量认定的药敏试验板进行药物敏感性检测,目前已进行质量认定的药敏板生产企业有:天津市金章科技发展有限公司和上海星百生物技术有限公司.检测用质控菌株由中监所统一供应. 附件3 采样记录表 采样地:养殖场: 采样时间:联系人姓名、

电话: 样品来源 猪 日龄 ____ 鸡 日龄 ____ 牛 日龄 ____ 其他________日龄 ____ 消化道 呼吸道 泌尿生殖道 肝胆 脑 淋巴结 关节 奶样 皮肤 粪便 其他_ 采样动物健康状况 养殖量 健康 发病及症状: . 采样养殖场使用抗菌药情况 饲料来源、添加抗菌药种类 治疗用抗菌药种类与使用方式 生产厂名称 饲料添加的药物名称 剂量 使用时间 药物名称 使用方式 剂量 单个动物剂量 饮水添加剂量 饲料添加剂量 用药天数 样品分离菌株 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 肠球菌 沙门氏菌 空肠弯曲杆菌 其他_菌株编号: 注:菌株编号按照 菌种、来源-采样地、采样年月-菌株编号 的格式进行.如EB-L0701-0001,其中:E(大肠杆菌)B(牛)L(鲁)07(年)01(月)-0001(菌株编号). 菌种简写建议为:E(大肠杆菌)、S(沙门氏菌)、SA(金黄色葡萄球菌)、ECi(肠球菌)、CJ(空肠弯曲杆菌)、CC(结肠弯曲杆菌) 动物简写建议为:B(牛)、P(猪)、C(鸡)、D(鸭) 注:a为喂奶猪或保温鸡,b为保育猪或生长鸡,c为育成猪或鸡,d为种母猪或产蛋鸡. 附件4 动物源细菌分离和鉴定方法

一、动物源大肠杆菌的分离与鉴定方法

1 范围 本方法规定了用于动物源大肠杆菌分离与鉴定的方法. 本方法适用于各种动物中大肠杆菌的分离与鉴定.

2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其它设备和材料如下. 2.1 冰箱:2℃~4℃和-20℃. 2.2 恒温培养箱:36℃±1℃. 2.3 电子天平:感量0.1g. 2.4 显微镜:10*~100*. 2.5 生物安全柜. 2.6 生化鉴定卡或商品化试纸条. 2.7 采样管或商品化采样棉拭子. 2.8 微量加样器:1μL~1000μL. 2.9 吸头(与微量加样器匹配).

3 培养基和试剂 3.1 运送培养基. 3.2 麦康凯琼脂. 3.3 大肠杆菌阳性血清.

4 大肠杆菌分离与鉴定程序 图1:大肠杆菌分离与鉴定程序

5 操作步骤 5.1 采样 选择养殖场或........