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五、第六孔中,再在第

五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;

混匀后从第

五、第六孔中各取50μl分别加到第

七、第八孔中,再在第

七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第

七、第八孔中分别取50μl加到第

九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉.(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为1800ng/L,1200ng/L ,600ng/L,300ng/L, 150ng/L). 2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔.在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍).加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀. 3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟. 4.配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用. 5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干. 6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外. 7.温育:操作同3. 8.洗涤:操作同5. 9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 10.???? 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色). 11.???? 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值). 测定应在加终止液后15分钟以内进行. 注意事项: 1.? 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存. 2.? 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果. 3.? 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差.一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样. 4.? 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔.如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(*n*5). 5.? 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染. 6.? 底物请避光保存. 7.? 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8.? 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理. 9.? 本试剂不同批号组分不得混用. 10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准. 计算: 以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;

再乘以稀释倍数;

或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度. 试剂盒性能: 1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上. 2.批内与批见应分别小于9%和11% 检测范围: 100ng/L -2000ng/L 保存条件及有效期: 1.试剂盒保存:;

2-8℃. 2.有效期:6个月 更多高品质优势产品请登录:www.afzhan.com/st45965 www.hbzhan.com/st46792 www.chem17.com/st182446