DOC《附件2（略）》

3、

5、

10、

50、

100、150和200μg/kg,对应牛奶样品添加浓度分别为

1、

5、

10、

50、

100、150和200μg/kg,供超高效液相色谱-串联质谱测定.以测得的美洛昔康特征离子峰面积与美洛昔康-D3特征离子峰面积之比作为纵坐标,对应的浓度为横坐标,绘制标准曲线.求线性回归方程和相关系数. 7.4 测定 7.4.1 色谱条件 色谱柱:C18,2.1mm*50mm,1.7μm或效能相当者. 流动相:A相为0.1%甲酸溶液;

B相为0.1%甲酸的乙腈溶液. 流速:0.4 mL/min. 柱温:40℃. 进样量:5?L. 梯度洗脱:梯度洗脱程序见表1. 表1 梯度洗脱条件 时间(min) 流动相A(%) 流动相B(%)

0 90

10 0.5

90 10 1.5

2 98 2.0

2 98 2.1

90 10 4.0

90 10 7.4.2 质谱条件 离子源:电喷雾离子源. 扫描方式:正离子扫描. 检测方式:多反应监测. 电离电压:2.5kV. 源温:150℃. 雾化温度:500℃. 锥孔气流速:150L/h. 雾化气流速:800L/h. 药物定性、定量离子对及对应的锥孔电压、碰撞能量见表2. 表2 药物定性、定量离子及锥孔电压、碰撞能量的参考值 化合物 定量离子对(m/z) 锥孔电压(V) 碰撞能量(eV) 美洛昔康 352.0 >

140.9

10 16 352.0 >

114.9a

10 16 美洛昔康-D3 355.1 >

114.9

10 16 (a定量离子) 7.5 测定法 7.5.1 定性测定 通过样品色谱图的保留时间与对照品的保留时间、各色谱峰的特征离子与相应浓度标准溶液色谱峰的特征离子相对照定性.样品与对照品保留时间的相对偏差不大于2.5%;

样品特征离子的相对丰度偏差不超过表3的规定,则可判断样品中存在相应的被测物. 表3 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 >

50% >

20%至50% >

10%至20% ≤10% 允许的相对偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 7.5.2 定量测定 取试样溶液和相应的基质匹配标准工作液,按内标法定量,标准工作液及试样溶液中美洛昔康的响应值均应在仪器检测的线性范围内. 7.6 空白试验 除不加试料外,采用完全相同的步骤进行平行操作.

8 结果计算和表述 单点校准:X= 或基质匹配标准曲线校准: 式中: X――试料中美洛昔康的残留量,μg/kg;

C――从标准曲线得到的美洛昔康浓度,μg/L;

Ai――试料溶液中美洛昔康的峰面积;

A'

is――基质匹配标准溶液中美洛昔康内标的峰面积;

Cs――基质匹配标准溶液中美洛昔康的浓度,μg/L;

Cis――试料溶液中美洛昔康内标的浓度,μg/L;

Ais――试料溶液中美洛昔康内标的峰面积;

As――基质匹配标准溶液中美洛昔康的峰面积;

C'

is――基质匹配标准溶液中美洛昔康内标的浓度,μg/L;

V――最终定容体积,mL;

m――称样量,g;

f――稀释倍数. 注:计算结果需扣除空白值,测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留三位有效数字.

9 检测方法灵敏度、准确度和精密度 9.1 灵敏度 本方法在猪、牛组织(肌肉、肝脏、肾脏)中美洛昔康的检测限均为3?g/kg,定量限均为4?g/kg;

在牛奶中美洛昔康的检测限为1?g/kg,定量限为2?g/kg. 9.2 准确度 本方法在2~130?g/kg添加浓度水平上的回收率为70%~110%. 9.3 精密度 本方法的批内相对标准偏差≤20%,批间相对标准偏差≤20%. 附录A (资料性附录) 图A1.1猪肝脏空白试样溶液特征离子质量色谱图 图A1.2 猪肝脏基质匹配美洛昔康标准溶液特征离子质量色谱图(4μg/kg) 图A1.3猪肝脏空白添加试样溶液特征离子质量色谱图(4μg/kg) 图A2.1牛肝脏空白试样溶液特征离子质量色谱图 图A2.2 牛肝脏基质匹配美洛昔康标准溶液特征离子质量色谱图(4μg/kg) 图A2.3牛肝脏空白添加试样溶液特征离子质量色谱图(4μg/kg) 图A3.1牛奶空白试样溶液特征离子质量色谱图 图A3.2 牛奶基质匹配美洛昔康标准溶液特征离子质量色谱图(2μg/kg) 图A3.3牛奶空白添加试样溶液特征离子质量色谱图(2μg/kg) 注:从上往下依次为美洛昔康-D3特征离子质量色谱图(355.1 >