DOC《中文说明书》

中文说明书 人I型胶原C末端前肽(PICP)ELISA检测试剂盒 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA).

往预先包被人I型胶原C末端前肽(PICP)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤.用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品中的人I型胶原C末端前肽(PICP)呈正相关.用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度. 样品收集、处理及保存方法 1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离. 2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝.3000转离心30分钟取上清. 3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物. 4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎.3000转离心10分钟取上清. 5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻. 自备物品 酶标仪(450nm) 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 37℃恒温箱 操作注意事项 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟.从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存. 预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作. 所有液体组分使用前充分摇匀. 试剂盒组成 名称 96孔配置 48孔配置 备注 微孔酶标板 12孔*8条12孔*4条无标准品(2000 pg/ml) 0.5mL 0.5mL 按说明书进行稀释 标准品稀释液 6mL 3mL 按说明书进行稀释 样本稀释液 6mL 3mL 按说明书进行稀释 检测抗体-HRP 6mL 3mL 无20*洗涤缓冲液 20mL 20mL 按说明书进行稀释 底物A 6mL 3mL 无 底物B 6mL 3mL 无 终止液 6mL 3mL 无 封板膜 2张 2张 无 说明书 1份 1份 无 自封袋 1个 1个 无注:标准品用标准品稀释液依次稀释为:

2000、

1000、

500、

250、

125、0pg/ml. 试剂的准备 20*洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20*洗涤缓冲液加19份的蒸馏水. 洗板方法 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次. 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次. 操作步骤 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃. 设置标准品孔、样本孔和空白孔,空白孔什么都不加;

标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;

随后标准品孔和样本孔中(空白孔不加)加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体50μL,,

用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板). 所有孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min. 所有孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值. 结果判断 绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值. 试剂盒性能 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900. 灵敏度:最低检测浓度小于1.0 pg/ml. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存. 有效期:6个月 检测范围:31.2pg/ml-2000pg/ml 免责声明 试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责. 严格按照说明书操作,不同批号不可交换使用,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担.