PDF《实验室注意事项》

实验室注意事项 邓晓蓓 2018.

5.30 实验操作过程必须戴手套、口罩和穿实验服 实验室基本规章制度―禁止在实验室吃东西 禁止穿实验服、戴手套到非实验区 禁止在实验室的水龙头洗手 实验垃圾分类 实验结束将移液器调至最大量程 移液器的使用方法…… 保持实验台面整洁、实验仪器关闭等 实验报告的写作 实验报告的结构

(一) l实验名称 ?用最简练的语言反映实验的内容.如组织 血液样本的分离. l学生姓名、学号、及合作者 l实验日期和地点(年、月、日)和(长宁 实验中心) 实验报告的结构

(二) l实验目的 ?目的要明确,在实践上,掌握使用实验设备 的技能技巧和程序的调试方法,如,明确分 离临床实验样本的方法等等. l实验试剂和仪器 ?在实验中需要用到的实验用物,药品以及对 环境的要求.如离心机、一次性滴管等等. 实验报告的结构

(三) l实验原理 ?在此阐述实验相关的主要原理. l实验内容 ?这是实验报告极其重要的内容.要抓住重点 ,可以从理论和实践两个方面考虑.只写主 要操作步骤,简明扼要描述实验过程.可以 画出实验流程图(实验装置的结构示意图) ,再配以相应的文字说明等. 实验报告的结构

(四) l实验结果 ?文字叙述: 根据实验目的将原始资料系统化 、条理化,用准确的专业术语客观地描述实 验现象和结果,要有时间顺序以及各项指标 在时间上的关系. ?

图表: 用表格或坐标图的方式使实验结果突 出、清晰,便于相互比较.每一

图表应有表 目和计量单位,应说明一定的中心问题. 实验报告的结构

(五) l实验结论 l结论不是具体实验结果的再次罗列,也不是 对今后研究的展望,而是针对这一实验所能 验证的概念、原则或理论的简明总结,是从 实验结果中归纳出的一般性、概括性的判断, 要简练、准确、严谨、客观. 临床样本的处理 主要研究方法-选择测量指标 一般原则: 1.生物标志应特异、稳定;

2.标本采集、储存方便;

3.检测方法比较简单、实用,而且操作规范, 便于与同类研究结果比较;

4.灵敏度和特异度高. 一般要求: 1.在采集和储存过程中不能受到"污染",包 括外界生物的、化学的和其他标本的"交叉污 染". 2.储存的生物标本在任何时候进行检测都可以 获得一致的结果. 3.所有生物标本都应有详细的背景资料和鉴别 标识. 4.储存时应注意储存条件,一般为冷藏保存. 标本的采集和储存 常见的生物标本(1) 1. 血液和口腔脱落细胞(液氮或者-80度冰箱) l血液 ?白细胞:基因组DNA提取并进行遗传多 态性的研究;

?血清、血浆:营养素、激素、血脂、以及 其它生物标志物的循环水平;

?淋巴细胞:分子流行病学表型的检测. l口腔细胞:无创、来源容易,但是量少. 常见的生物标本(2) 2. 尿液(0度以下的冰箱内) l 用于检测多种与肿瘤有关的暴露和代谢生 物标志物,如羟基多环芳烃来评价PAHs;

l 易受细菌和真菌的污染. 3. 肿瘤组织(液氮或者-80度冰箱) l 免疫组化、原位核酸杂交、Western blot的 方法检测某些特异蛋白的表达;

l RT-PCR检测目的基因的mRNA表达水平. 贴块法 消化法

93 消化法培养步骤图解- 复习 贴块培养步骤图解-复习 血液样本 样本储存 组织RNA的提取 基于RNA来源的核酸分子标志物(1) l 蛋白编码功能的相关基因的mRNA;

? 信使RNA是由DNA的一条链作为模板转录而来的、 携带遗传信息的,能指导蛋白质合成的一类单链核 糖核酸. 基于RNA来源的核酸分子标志物(2) l 不具有蛋白编码功能,但行驶重要调节功能的 microRNA(miRNA) ? microRNA:是一类由内源基因编码的长度约为22个核 苷酸的非编码单链RNA分子,它们在动植物中参与转 录后基因表达调控. 基于RNA来源的核酸分子标志物(3) l 不具有蛋白编码功能,但行驶重要调节功能 的长链non-coding RNA(lncRNA) ? 长度大于

200 个核苷酸的非编码 RNA. l Trizol试剂是一个包含酚、异硫氰酸胍和SDS 的单相酸性溶液,其在裂解细胞的同时抑制 RNase的活性,随后加入氯仿,酚会大量的溶解 在氯仿中. Trizol法提取RNA的原理

(一) l 由于DNA和RNA在酸性酚中的溶解性不同, 造成DNA分布在下层的氯仿酚溶液中,RNA则 分布在上层的水相中;

l 最后用异丙醇沉淀水相中的RNA,并用70% 乙醇洗涤沉淀,这样就可以得到比较纯净的总 RNA. Trizol法提取RNA的原理

(二) 大致实验流程 RNA纯度分析(1) l RNA质检参数OD260/OD

280、OD260/OD230 的意义. l

260、

280、

320、230 nm下的吸光度分别代表 了核酸、蛋白质、盐浓度和有机溶剂的值. l A230: 测定其它碳源物质,如酚,糖类等. l A260:核酸的吸收峰测,测RNA,DNA,引 物等的浓度. l A280:蛋白质的吸收峰. RNA纯度分析(2) l OD260/OD280(Ratio)在1.8~2.1范围内时, RNA中蛋白的污染是可以容忍. l 当R < 1.8时,溶液中蛋白的污染比较明显. l 当R > 2.2时,说明RNA已经水解成单核酸了. l 纯RNA的OD260/OD280的比值为2.0.