PDF《中华人民共和国国家标准 食物中核黄素的测定方法》

12391―1990 中华人民共和国国家标准 食物中核黄素的测定方法 Method for determination of riboflavin in foods GB/T 12391―1990

1 主题内容与适用范围 本标准规定了用微生物法和荧光法测定食物中核黄素含量.

本标准适用于各类食物中核黄的测定.

第一篇 微生物法

2 原理 某一种微生物的生长(繁殖)必需某些维生素.例如干酪乳酸杆菌 (Lactobacillus casei,简称 L.C. )的生长需要核黄素;

培养基中若缺乏这 种维生素该细菌;

便不能生长.在一定条件下,该细菌生长情况.以及它的代谢 物乳酸的浓度与培养基中该维生素含量成正比, 因此可以用酸度及混浊度的测定 法来测定样品中核黄素的含量.

3 试剂 本实验用水均需蒸馏水.试剂纯度均为分析纯. 3.1 冰乙酸. 3.2 甲苯. 3.3 无水乙酸钠. 3.4 乙酸铅. 3.5 氢氧化铵. 3.6 干酪乳酸杆菌(Lactobacillus casei ATCC 7489) . 3.7 盐酸:0.1 mol/L. 3.8 氢氧化钠:1 mol/L 和0.1 mol/L. 3.9 0.9%氯化钠溶液(生理盐水) :使用前应进行灭菌处理. 3.10 核黄素标准储备液(25 ug/mL) :将标准品核黄素粉状结晶置于真空干燥 器或盛有硫酸的干燥器中.经过

24 h 后.准确称取

50 mg,置于

2 L 容量瓶中, 加入 2.4 mL 冰乙酸和 1.5 L 水.将容量瓶置于温水中摇动,待其溶解,冷至室 温,稀释至

2 L,移至棕色瓶内,加少许甲苯盖于溶液表面,于冰箱中保存. 3.11 核黄素标准中间液(10 ug/mL),准确吸取

20 mL 核黄素标准储备液,加 水稀释至

50 mL. 3.12 核黄素标准中间液(0.1 ug/mL) ,准确吸取 1.0 mL 中间液于

100 mL 容 量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀.每次分析要配制新标准使用液. 3.13 碱处理蛋白胨:分别称取

40 g 蛋白胨和

20 g 氢氧化钠于

250 mL 水中. 混合后,放于 37±0.5℃恒温箱内,24~48 h 后取出,用冰乙酸调节 pH 至6.8, 加14 g 无水乙酸钠(或23.28 含有

3 分子结晶水的乙酸钠) ,稀释至

800 mL, 加少许甲苯盛于溶液表面,于冰箱中保存. 3.14 0.1%胱氨酸溶液:称取

1 gL―胱氨酸于小烧杯中.加20 mL 水,缓慢加 入经约 5~10 mL 盐酸,直至其完全溶解,加水稀释至

1 L,加少许甲苯盖于溶 中华人民共和国卫生部 1990―03―19 批准 1990―12―01 实施 中华人民共和国卫生部 1990―03―19 批准 1990―12―01 实施 www.grainnet.cn 12391―1990 液表面. 3.15 酵母补充液:称取

100 g 酵母提取物干粉于

500 mL 水中、称取

150 g 乙酸铅于

500 mL 水中.将两溶液混合,以氢氧化铵调节 pH 至酚酞量红色(取少 许溶液检验) .离心或用布氏漏斗过滤,滤液用冰乙酸调节 pH 至5.5.通入硫化 氢直至不生沉淀.过滤,通空气于滤液中,以排除多余的硫化氢.加少许甲苯盖 于溶液表面,于冰箱中保存. 3.16 甲盐溶液:称取

25 g 磷酸氢二钾和

25 g 磷酸二氢钾,加水溶解,并稀 释至

500 mL.加放少许甲苯以保存之. 3.

17 乙盐溶液: 称取

10 g 硫酸镁 (MgSO4・ 7H2) , 0.5 g 硫酸亚铁 (FeSO4・7H2O) 和0.5 g 硫酸锰(MnSO4・4H2O) ,加水溶解,并稀释至

500 mL,加少许甲苯以保 存之. 3.18 基本培养储备液:将下列试剂混合于

500 mL 烧杯中,加水至

450 mL, 用1mol/L 氢氧化钠溶液调节 pH 至6.8,用水稀释至

500 mL. 碱处理蛋白胨

100 mL 0.1%胱氨酸溶液

100 mL 酵母补充液

20 mL 甲盐溶液

10 mL 乙盐溶液

10 mL 无水葡萄糖

10 g 3.19 琼脂培养基:将下列试剂混合于