PDF《产品说明书》

1 mg/ml(1.5 mM)的储存液. 2.3 用2*SSC 缓冲液按 1:3000 将1mg/ml(1.5mM)的PI 储存液稀释至

500 nM.加 入染色液覆盖细胞(每个样品大概需要使用

300 μl 染色液),孵育 1~5 分钟. 2.4 用2*SSC 缓冲液冲洗样本数次.弃去玻片上多余的缓冲液,将玻片置于合适的支 架上,滴加抗荧光淬灭剂封片. 2.5 选择合适的滤光片用荧光显微镜镜检. 悬浮细胞复染(流式细胞仪观察) 样品准备:选择合适的方法对标本进行固定,或者按照以下步骤操作: 3.1 收集 2*105 ~1*106 个的悬浮细胞. 3.2 离心细胞,弃去上清液. 3.3 加入

1 ml 常温的 PBS,轻弹离心管管壁使细胞分散于 PBS 缓冲液中. 3.4 在高速旋涡混合的条件下用移液管缓慢将细胞悬液缓慢加入

4 ml -20℃预冷的无水 乙醇中,-20℃放置 5~15 分钟. 3.5 离心弃去无水乙醇. Propidium Iodide 使用说明书

4 3.6 轻弹离心管管壁使细胞分散,并加入 5ml 常温的 PBS,使细胞重新水化

15 分钟. 样品复染 4.1 将1mg/ml(1.5 mM)的PI 储存液用染色缓冲液(100 mM Tris,pH7.4,

150 mM NaCl,1 mM CaCl2,0.5 mM MgCl2,0.1% Nonidet P-40)按1:500 的 比例稀释至

3 μM 浓度.每个细胞样品大约需要使用

1 ml 染色液. 4.2 将从步骤 3.6 获得的细胞悬液离心,弃去上清液.轻弹离心管管壁使细胞分散,加入1ml 稀释好的 PI 染色液.室温下孵育

15 分钟.然后使用流式细胞仪观察染色 结果.如果使用荧光显微镜观察结果,将样品离心,弃去上清液,用新鲜的缓冲 液重悬细胞,吸取一滴细胞悬液于载玻片上,用抗荧光淬灭剂封片并加盖盖玻 片,选择合适的滤光片镜检染色结果. 染色体 FISH 复染 样品准备 按照操作指南中的标准流程准备样品.染色前用蒸馏水短暂冲洗最后处理过的样品, 除去玻片上残留的缓冲液,使样品在空气中干燥.此步骤可以减少由于玻片上残留的 缓冲液产生的非特异性染色. 样品复染 5.1 用PBS 按1:1000 比例将

1 mg/ml(1.5 mM)的PI 储存液稀释为 1.5 μM 的PI 染 色液,用移液器吸取

300 μl 稀释好的染色液加入到样品中.若样品需要加入 RNase A(新鲜配制)处理,请调节使 RNase A 的终浓度为

10 μg/ml.可用塑料 盖玻片使染色液在载玻片上均匀分布. 5.2 将样品避光,室温下温育

30 分钟,如果加入了 RNase,则温育的温度为 37℃. 5.3 小心移去盖玻片,用PBS 或者蒸馏水洗涤样品,除去未结合的染色液. 5.4 用吸水纸小心从样品边缘将多余的液体吸干,盖上一玻璃盖玻片,边缘用中性树 脂或指甲油封片.如果需要抗荧光淬灭剂,请按照试剂厂商提供的指南操作. 5.5 选择合适的滤光片在荧光显微镜下观察染色结果. 参考文献 1. Methods Enzymol 168,

741 (1989);

2. Pardue, M.L. in Nucleic Acid Hybridization, A Practical Approach,. B.D. Hames and S.J. Higgins, Eds., IRL Press, Oxford, England (1985). GeneCopoeia Products are for Research Use Only Copyright ?

2016 GeneCopoeia,Inc. Trademarks: GeneCopoeiaTM. BP007160923