PDF《产品说明书》

NBD C6-Ceramide ――高尔基复合体荧光探针 产品货号 包装规格 C049

1 mg 储存条件:-20℃,避光保存.

激发/发射波长:466/536 nm 产品说明书 GeneCopoeia, Inc. 广州易锦生物技术有限公司 广州高新技术产业开发区广州科学城 掬泉路

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2016 GeneCopoeia, Inc. NBD C6-Ceramide 使用说明书 产品介绍 NBD C6-Ceramide(NBD C6-神经酰胺)可以用来研究神经鞘脂类的运输与代谢机 制,也可以用来作为活细胞或经过固定的细胞样品内高尔基体的选择性染料. NBD C6-Ceramide 是目前应用较广泛的选择性染色高尔基复合体的探针.NBD C6- Ceramide 在水溶液中荧光信号非常微弱,但是在非质子溶剂或其他非极性溶液中荧光 信号增强,最大激发、发射波长可达 466/536 nm. 产品信息 分子式:C30H49N5O6 分子量:575.75 CAS 号:86701-10-2 注意事项 ? 为避免反复冻融,建议适当分装. ? 对于微量的液体,每次使用前请先高速离心数秒,使液体充分沉降到管底. ? 荧光染料不可避免的存在淬灭问题,请存放及操作时尽量注意避光,以减缓荧光的淬灭. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作. 实验步骤 制备 NBD C6-Ceramide-BSA 复合物 对于活细胞或固定细胞的染色,使用添加 BSA 的NBD C6-Ceramide-BSA 复合物能够 得到较好的染色效果.NBD C6-Ceramide-BSA 复合物制备方法如下: 1.1 以氯仿:乙醇(体积比 19:1)为溶剂配制

1 mM NBD C6-Ceramide 溶液;

1.2 吸取

50 ?l NBD C6-Ceramide 溶液于小玻璃试管中,保持干燥,通入氮气流,然后 在真空状态保持至少

1 小时,以200 ?l 无水乙醇重溶. 1.3 量取

10 ml 无血清的平衡盐溶液(如Hank's 液+10 mM HEPES,pH 7.4 (HBSS/HEPES))到50 ml 塑料离心管中,加入 3.4 mg(使其浓度为 0.34 mg/ml)的脱脂 BSA. NBD C6-Ceramide 使用说明书 1.4 将含有

10 ml BSA 溶液的试管置于漩涡混合器上混匀,加入

200 ?l NBD C6- Ceramide 溶液,漩涡震荡混匀,所得溶液(5 ?M NBD C6-Ceramide+5 ?M BSA)保存于-20°C. 活细胞高尔基复合体染色 2.1 用合适的缓冲液(如HBSS/HEPES)冲洗盖玻片上的细胞;

2.2 加入

5 ?M NBD C6-Ceramide+5 ?M BSA 溶液于 4℃孵育细胞

30 分钟;

2.3 用预冷的新鲜培养基反复冲洗细胞数次,37℃孵育细胞

30 分钟;

2.4 用新鲜培养基冲洗细胞,荧光显微镜镜检. 经过固定处理的细胞高尔基复合体染色 注意:染色条件同活细胞样品,但应避免使用含甲醇/丙酮类的固定剂. 3.1 用HBSS/HEPES 缓冲液冲洗盖玻片上的细胞,用0.5%戊二醛/10%蔗糖/100 mM 的PIPES 缓冲液(pH 7.0)或者 2~4%多聚甲醛(溶于 PBS)溶液室温下固定 5~10 分钟;

3.2 用预冷的 HBSS/HEPES 反复冲洗细胞数次,加入

5 ?M NBD C6-Ceramide+5 ?M BSA 溶液于 4℃冰浴孵育

30 分钟;

3.3 用HBSS/HEPES 冲洗细胞样品,以10%的FBS 或者

2 mg/ml 的BSA 在室温下孵 育30~90 分钟,以加强高尔基体染色效果;

3.4 用新鲜的 HBSS/HEPES 将细胞样品冲洗干净,荧光显微镜镜检. NBD C6-Ceramide 使用说明书 使用许可与质量保证 使用限制 以下条款适用于 NBD C6-Ceramide 产品.若您不能接受这些条款,请在

5 个自然日内 将产品完整退还给 GeneCopoeia.产品购买者需遵守最终用户限制许可条例.本产品 仅限购买者内部研究使用,不得使用于人体或诊断、治疗.未经 GeneCopoeia 事先书 面同意,本产品不得转售,不得重新包装或修改后转售,不得用于生产商用产品. 质量保证 GeneCopoeia 保证产品与产品数据表中描述的规格保持一致.若经 GeneCopoeia 证实产品未 达到规格要求,GeneCopoeia 将为您替换产品.若无法替换,GeneCopoeia 将退款给购买者.此 质量保证仅适用于最初产品购买者.GeneCopoeia 仅负责替换产品或退还实际的购买金额.对于 由使用或不正确使用产品产生的损害或使用其他相关材料和试剂产生的损耗,GeneCopoeia 不承 担责任.GeneCopoeia 不提供任何形式的明示的或者默示的保证,包括对适销性、适用于特定用 途的默示保证. GeneCopoeia 致力于为消费者提供高质量的研究产品.如果您对 GeneCopoeia 的产品有任何 问题或疑虑,请拨打电话 4006-020-200 联系我们. ? 2016, GeneCopoeia, In GeneCopoeia, Inc.