PDF《TECHNICAL DATA SHEET》

4. 取100?l的细胞悬液于5ml流式管中,加入5?l Annexin V/PE混匀后于室温避光孵育5分钟;

5. 加入10?l 20ug/ml的7AAD,并加400?l PBS,立刻进行流式检测. 实验设计: 1)未转染细胞 空白管:阴性对照组细胞,不加Annexin V/PE,7AAD.用于调节电压 单染管(两管):有明显凋亡的细胞,只加Annexin V/PE或只加7AAD.用于调节补偿 检测管:处理的细胞,加Annexin V/PE,7AAD.用空白管和单阳管调节好电压补偿后,获得所需要的流式数据. 2)转染GFP细胞 未转染空白管:未转染细胞,不加Annexin V/PE,7AAD.用于调电压 未转染单染管:未转染且有明显凋亡的细胞,只加Annexin V/PE或只加7AAD.用于调节补偿 转染GFP空白管:转染GFP对照组细胞,不加Annexin V/PE,7AAD.用于调补偿 检测管:处理的细胞,加Annexin V/PE,7AAD.调节好电压补偿后,获得所需要的流式数据. 常见问题:

1、Annexin V/ 7AAD 凋亡检测的试剂盒能否检测人以外其他动物的细胞凋亡情况? 可以.因为 Annexin V 是与磷脂酰丝氨酸(PS)亲和,而PS 在不同种属间没差异.在正常细胞中,PS 只分布在细胞膜 脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,PS 由脂膜内侧翻向外侧.

2、贴壁细胞做凋亡用胰酶消化下来对细胞膜损伤? 低浓度胰酶消化,轻柔吹打贴壁细胞 2~3 次,离心机 4℃1000rpm 5min 离心,处理得当的话,胰酶造成损伤可以控 制在 5%以内,有对照组的情况下对实验结果不会造成明显影响.

3、贴壁细胞可以先染 PI 然后再消化下来吗?这样是否可以减小由于消化液造成的细胞膜破损而染上的 PI 的误差? 先加 PI 不仅染色是否每组都均匀充分很难判断,而且 PI 本身对细胞也是有毒性的,对实验结果影响会比胰酶大,不 建议这样做.

4、为什么只能用不含 EDTA 的胰酶消化贴壁细胞,用含 EDTA 的胰酶消化细胞对结果有什么影响? 因为 Annexin V 是Ca 依赖的蛋白,所以不能加入 EDTA,防止 EDTA 螯合了 Ca 离子从而影响 Annexin V,进而影响 结果.

5、你们哪种凋亡检测试剂盒能用于转染 GFP 细胞的凋亡检测? FXP027 Annexin V- PE/7AAD Kit 凋亡检测试剂盒 FXP023 AnnexinV-Alexa Fluor 647/PI Kit 凋亡检测试剂盒 4A Biotech Co., Ltd. Add: NO. 88, 6th Kechuang St, Biomedical Park, Beijing Economic-Technological Development Area, 101111, China. Website: www.4abio.com Toll Free (China only): 400-7060-959 Technical support: tech@4abio.com 实验参考图 Jurkat 细胞用紫外诱导凋亡后用 Annexin V-PE/7AAD 双染流式分析图谱 相关产品 Catalog No. Product Name Applications FXP018 AnnexinV-FITC/PI 凋亡检测试剂盒 FC FXP022 AnnexinV-Alexa Fluor 488/PI 凋亡检测试剂盒 FC FXP025 AnnexinV-eGFP/PI 凋亡检测试剂盒 FC FXP023 AnnexinV-Alexa Fluor 647/PI 凋亡检测试剂盒 FC