PDF《C12P 19/12 (2006.01)》

[19]中华人民共和国国家知识产权局 [12]发明专利申请公布说明书 [11]公开号 CN 101186939A [43]公开日 2008年5月28日[21]申请号 200710180720.

0 [22]申请日 94.6.27 [21]申请号 200710180720.0 [30]优先权 [32]1993.09.30 [33]JP [31]265416/93 [32]1994.06.27 [33]CN [31]94107243.6 [71]申请人 株式会社林原生物化学研究所 地址 日本冈山县 [72]发明人 丸田和彦 久保田伦夫 杉本利行 三宅 俊雄 [74]专利代理机构 中国国际贸易促进委员会专利商标 事务所 代理人 罗菊华 [51]Int.CI. C12P 19/12 (2006.01) 权利要求书

1 页 说明书

46 页 附图

8 页[54]发明名称 非还原性糖类生成酶及其制备和应用 [57]摘要 公开了一种新的非还原性糖类生成酶及其制备 和应用.这种酶可从Rhizobium Sp.M-11(FERMBP4 130)和Arthrobacter Sp.Q36(FERM BP-4316)等微 生物的培养物中获取,当其作用于还原性淀粉部分 水解产物时可生成具有海藻糖结构的非还原性糖类. 当葡萄糖淀粉酶和α-葡糖苷酶作用于这种非还原 性糖类时,易于产生海藻糖.这种非还原性糖类和 海藻糖可广泛应用于食品、化妆品和药品中. 200710180720.0 权利要求书第1/1页21.制备如下式所示非还原性糖类或者含有该非还原性糖类的 糖组合物的方法, Gn-T 其中,符号 G 表示葡萄糖残基;

n 为一个或多个整数;

T 表示α,α-海藻糖, 该方法包括步骤: (a)将淀粉物质部分水解,获得含有直链淀粉和/或麦芽寡糖 的还原性淀粉部分水解产物;

(b)将能够形成如上式所示非还原性糖类的酶作用于步骤(a) 中所述还原性淀粉部分水解产物,以形成所述非还原性糖类或者含 有该非还原性糖类的糖组合物;

和(c)收集所得到的非还原性糖类或者含有该非还原性糖类的 糖组合物. 2.如权利要求1所述的方法,其中用选自由α-淀粉酶、β- 淀粉酶、葡糖淀粉酶和α-葡糖苷酶组成的组的一种或者多种酶将 所述非还原性糖类进一步水解. 3. 如权利要求1 所述的方法,其中步骤(c) 还包括将所得到 的混合物中的残余还原性糖类氢化成糖醇类. 4. 如权利要求1 所述的方法,其中步骤(c) 还包括将所得到 的混合物用离子交换剂进行柱层析,以除去杂质. 200710180720.0 说明书第1/46页3非还原性糖类生成酶及其制备和应用 本发明涉及一种新的非还原性糖类生成酶,以及它的制备和应用. 更具体地说,涉及这样一种新的还原性糖类生成酶:当其作用于一种 或多种具有3 个或3 个以上的葡萄糖聚合度的还原性淀粉部分水解产物时,生成一种具有海藻糖结构的非还原性糖类,还涉及这种酶的制 备,以及能够产生这种酶的微生物.本发明还涉及含有可由这种酶制 备的以海藻糖结构为末端单元的非还原性糖类的组合物,含有上述非 还原性糖类的还原性比较低的糖类,和/ 或由这种糖类所制备的海藻糖. 海藻糖或α,α- 海藻糖长期以来一直被认为是由葡萄糖单元组成 的非还原性糖类.正如在Advance? in? Carbohydrate? Chemistry,18卷, 第201-225(1963) 中( 由美国的Academic? Press 出版) 和在Applied and? Environmental? Microbiology ,第56 卷,3213-3215 页(1990) 中 所公开的,海藻糖广泛存在于微生物、蘑菇和昆虫中,但含量较低. 由于非还原性糖类包括不会与具有氨基的物质,如氨基酸和蛋白质反 应的海藻糖,所以它们即不会引起氨基- 羰基反应,也不会改变含有氨基酸的物质.因此,非还原性糖类被认为可以使用而不用担心会引 起不理想的褐变和变质.因为上述原因,就迫切需要建立一种制备这 种还原糖的方法. 在海藻糖的传统制备方法中,和在日本专利公开号No.154,485,75 中所公开的,采用的微生物,或者如日本专利公开号No.216,695/83 中提出的,同时采用麦芽糖酶- 和麦芽糖磷酸化酶将麦芽糖转化成海藻糖.然而,前一种方法不适于工业规模的制备,因为海藻糖在作为 原材料的微生物中的含量以干固体物计(d.s.b.)低于15w/w%( w/w % 的表达形式在说明书中可简化为%,除非另有说明) ,且 分离和提纯步骤复杂.而后一种方案具有如下缺点: 200710180720.0 说明书第2/46页4(i) 因为海藻糖是通过葡萄糖-1- 磷酸生成的,作为底物的麦芽糖 不能以较高的浓度使用;