PDF《操作步骤》

DNase I储存液的配制 将DNase I干粉(1500 U)溶解在550 μl RNase-Free ddH2O中,轻柔混匀,分装 后-20℃贮存(可保存9个月).

注意:从-20℃融化后的DNase I储存液保存于4℃(可保存6周),不要再次冻存. 操作步骤 1. 红细胞裂解液的稀释:根据处理血液样品的体积选取适当体积的10*红细胞裂解液(例 如待处理的血液样品体积为200 μl,则取140 μl 10*红细胞裂解液),用RNase-Free ddH2O稀释至1*红细胞裂解液. 2. 向1体积人类全血中加5倍体积1*红细胞裂解液(需自备合适的干净管子). 注意:为获得最佳的混匀效果,血液和1*红细胞裂解液的混合液体积不应超过管子体积 的3/4.如果血液中的白细胞含量较高,可按比例减小血液的使用体积,第6步中的裂解 液RL的使用体积也要进行相应调整. 3. 在冰上孵育10-15 min,在孵育过程中涡旋振荡混匀2次. 注意:在孵育的过程中溶液将变成半透明状态,表明红细胞裂解.如果必要的话,孵育 时间可延长至20 min. 4. 4℃ 2,100 rpm (~400*g)离心10 min,将上清完全去除. 注意:离心后白细胞可能会形成小球,确保完全去除上清,痕量红细胞的存在,会使白 细胞小球呈现红色,而该现象会在随后的漂洗步骤中消失. 5. 向白细胞沉淀中加入1*红细胞裂解液(加入1*红细胞裂解液的体积是第1步中全血用量 的2倍),重悬细胞. 6. 4℃,2,100 rpm (~400*g)离心10 min,将上清完全去除. 注意:如果上清去除不完全将会影响裂解及随后的RNA与膜的结合,导致最后RNA产率 降低. 7. 向白细胞沉淀中加入裂解液RL(使用前请加入β-巯基乙醇),具体加量按照下表进行, 涡旋或使用移液器混匀. 注:如果血液不是健康人的全血,需要根据血液中白细胞的数量来确定所需裂解液RL的 体积,此时细胞应完全裂解,块状细胞沉淀消失. 裂解液RL(μl) 健康人类全血(ml) 白细胞数量

350 多至0.5 多至2*106

600 0.5-1.5 2*106 至1*107 产品简介 本试剂盒可从血液中快速提取总RNA,可同时处理大量不同样品.提取的总RNA纯 度高,没有蛋白和其它杂质的污染,可用于RT-PCR、Real Time RT-PCR、芯片分析、 Northern Blot、Dot Blot、PolyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆等多种下游 实验. 预防RNase污染,应注意以下几方面 1. 经常更换新手套.因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase污染. 2. 使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染. 3. RNA在裂解液RL中时不会被RNase降解.但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的 塑料和玻璃器皿.玻璃器皿可在150℃烘烤4h,塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10 min, 然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase. 4. 配制溶液应使用RNase-Free ddH2O.(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓 度0.1%(V/V),混匀后放置过夜,高压灭菌.) 注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项. 1.操作前在RL中加入β-巯基乙醇至终浓度1%,如1 ml RL中加入10 μl β-巯基乙醇.此裂解 液最好现用现配.配好的 RL

4 ℃可放置一个月,裂解液RL在储存时可能会形成沉淀,如 果有沉淀出现,请加热溶解后使用. 2.第一次使用前应在漂洗液RW中加入无水乙醇,加入量请参见瓶上标签. 3.人类的血液或体液可能有潜在的感染性,所以如果对人类的全血进行处理,请注意做好 防护措施. 4.本试剂盒最多能处理1.5ml健康的人类全血(健康人的全血中白细胞含量为:最多4000- 7000个白细胞/μl血液),如果血液中白细胞的含量较高,可按比例减少血液的用量,本 试剂盒最多可处理的白细胞数量为:1*107 . 5.在白细胞裂解后,该说明书中的所有步骤需在室温(15-25℃)进行,操作速度越快越 好. 6.细胞溶解物(在裂解液RL中)可以存放在-70℃,待使用时,将其置于37℃孵育10 min, 以保证所有的盐都溶解,然后进行操作步骤第7步. 7.本试剂盒不适用于冻存的全血. 版本号: DP190318 RNAprep Pure Blood Kit RNAprep pure血液总RNA提取试盒 (离心柱型) 目录号:DP433 8. 将溶液转移至过滤柱CS中(过滤柱CS放在收集管中),12,000 rpm (~13,400*g )离心