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6 7 后室温震荡#@! 用#9 J注射器注射大绿果时期的 草莓果实! 待果实出现差异后拍照)同时分析分子 和生理指标! 分别分析 ! # ( ) * '- ! # +,-- ! # . ! /

0 基因在干扰前后 的 基因 表 达量 变化)测定果实中 E

2 E 含量- 可溶性糖含量- 花青素含量和果实硬度) 对照为不含! # ( ) * '反向基因的空载体D

2 R # ! #! 侵 染过程与 Q : G H J ' I NE /载体侵染过程完全一致) !结果与分析 @A ?草莓果实1 $

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4 $基因克隆及载体构建 因为草莓 ! # ( ) * ' 基因存在于各 个发 育时期 的草莓果实中! 因此基因扩增时选其中一个时期的 果实就可以)使用试剂盒提取的草莓果实 I NE 纯 度高! 浓度适中)扩增后测序! 得 到长度 为$$$F D ! # ( ) * '基因核苷酸开放阅读框! 编码# ) *个氨基 酸序列" 图## ) 为了构建干扰载体! 将- # 1和2

3 # 的酶 切位点加入到上下游引物中!反向插入植物表达载体D

2 R # ! #上! 构建完成Q : G H J ' I NE /载体) @A @1 $

2 3

4 $基因的蛋白序列比对及进化树分析 利用7 ;

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5软件!将草莓Q : G H J '蛋白与其图#! # ( ) * '基因全长序列 Q / > - #X @ C:

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1 C 它物种的 G H J '蛋白进行序列比对! 结果" 图!# 发现! G H J ' 蛋白在物 种中有个 高度 保守的区域! 为GHI,G H J,I

7 EI, ;

/ K C ! 约含有# * *个氨基酸残基! 在这# * *个残基中! 有疏水配基结合位点共% %个! 有蛋白作用位点共 ) 个! 有 通道 位点!个)G H I, G H J,I

7 EI, ;

/ K C区域是 G H J '蛋白与其它蛋白进 行作用的核心区域) 利用 Y8 6E $ 软件将草莓 Q : G H J ' 蛋白序 列 与其它物种的 G H J '蛋白序列构建进化树! 结果" 图%#显示! 草莓与梅- 梨- 苹果的亲缘关系最近! 其次是 巨桉-甜橙- 胡杨- 香瓜- 番茄- 鹰嘴豆和蒺藜状苜蓿! 与葡萄- 芝麻的亲缘的关系最远) @A B草莓中1 $

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4 $基因表达模式分析 对草莓中 ! # ( ) * ' 基因在草莓果实发育 & 个 时期的表达量进行分析! 结果" 图*# 表明! 在草莓果 实中! # ( ) * '基因的表达 量在草莓 果实发育前%个时期" 绿果期# 都比较低) 随着草莓果实发育! 从第*个时期" 白果期# 开始! ! # ( ) * '基因的表达量 开始迅速增加)在果实开始 变红 时表 达量 达到 最高! 并且在红果期一直维持在较高的水平! 是果实发 育初期表达量的*倍以上)这个结果初步说明! 在 草莓果实成熟过程中! 草莓 ! # ( ) * '基因是起到调 节成熟的作用! 表明! # ( ) * '基因可以正向调节果 实成熟) @A C1 $

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4 $基因在草莓果实中的干扰 通过瞬 时表达! 将含有D2R#!#" 对照# 和Q:+GHJ'I NE /质粒的农杆菌 6` % # " #! 注射大绿果时 期" 花后# $L # 的草莓果实)结果" 图$ # 表明! 注射& L时! 对照果实开始变红! 而注射 Q : G H J ' I NE /的 果实仍然是绿色)注射# *L后发现! 对照果实已经 变红! 而注射Q:GHJ'INE /的果 实只 有部 分变 红"图$ # )这表明与对照相比! ! # ( ) * ' 基因干扰的 草莓果实! 比对照延迟%$L天变红! ! # ( ) * '基 因的干扰会延迟果实上色)更进一步说明! # ( ) * ' 基因能够促进草莓果实成熟) 干扰后对草莓果实生理水平变化进行分析! 结#)%!#!期颜志明! 等$ ! # ( ) * '基因调控草莓果实成熟的分子机理 图!草莓 Q : G H J '蛋白的保守域和氨基酸一致性比较 从上至下依次代表梨- 苹果- 草莓- 梅子- 甜橙- 胡杨- 香瓜- 巨桉- 鹰嘴豆- 蒺藜状苜蓿- 番茄- 芝麻- 葡萄中相应的 G H J '氨基酸序列& 方框内标注的是 G H I,G H J,I