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0 1 3年 7月 第15卷 第 7期 中国现代中药 M o d e r nC h i n e s e M e d i c i n e J u l

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1 3 V o l

1 5 N o

7 [ 基金项目] 中国科学院知识创新工程重要方向项目― ― ―重要 C I T E S附录物种资源评估及致危机理( K S C X

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4 ) ;

自然 科学基金面上基金(

3 1

0 7

0 4

6 9 ) ;

科技基础性工作专项重大项目(

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1 3 F Y

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0 0 ) [ 通讯作者] 蒋志刚, T e l : (

0 1

0 )

6 4

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6 8 , E m a i l : j i a n g z g @i o z a c c n HI C O I FJKLMNOPQRSTUVIW

5 陈静1 ,

2 ,蒋志刚1 ,

2 (

1 中国科学院动物研究所 动物生态与保护生物学重点实验室,北京

1 0

0 1

0 1 ;

2 中国科学院大学,北京

1 0

0 0

4 9 ) [ 摘要] 目的:用COI序列作为分子标记鉴定赛加羚羊角与其代用品山羊 C a p r ah i r c u s 、绵羊 O v i s a r i e s 、藏原 羚Procaprap i c t i c a u d a t a 、蒙原羚 P g u t t u r o s a 、鹅喉羚 G a z e l l as u b g u t t u r o s a 和藏羚 P a n t h o l o p s h o d g s o n i i 的角,为监管羚 羊角市场贸易和控制赛加羚羊角走私提供技术支持.

方法:从 3种不同类型的赛加羚羊角以及藏原羚、蒙原羚、鹅 喉羚样品中提取基因组 D N A ,设计巢式 P C R体系,扩增

3 4 9b pC O I 片段,结合从 G e n B a n k中下载的序列构建赛加 羚羊及其代用品的系统发育树.结果:保存期 1~ 2年的新鲜赛加羚羊角中提取出的基因组 D N A浓度比陈旧羚羊 角、羚羊角片的高,而陈旧羚羊角不同位置提取出的基因组 D N A浓度差别较小.N J 树上,7个物种分别单独聚 群,形成独立的分枝,支持率都达到了

9 9 %以上.结论:D N A分子鉴定技术结合针对低浓度基因组 D N A模板的 巢式 P C R反应体系客观准确地区分了赛加羚羊角和其易混代用品.本研究不仅为赛加羚羊角的分子鉴定技术建立 了操作方法,而且提供了参考序列,简化了实际应用中的鉴定流程,对赛加羚羊贸易监管以及走私监控具有实践 参考意义. [ 关键词] 羚羊角;

贸易;

代用品;

基因组 D N A ;

C O I ;

分子鉴定 羚羊角是牛科动物赛加羚羊 S a i g at a t a r i c a的角 ( 以下简称羚羊角) ,因具有清热解毒等功效而被广 泛使用.1 9世纪

6 0年代,分布于我国新疆地区的赛 加羚种群因过度捕猎而灭绝[

1 ] .前苏联解体后,分 布于其他中亚国家的种群也由于盗猎、疾病等原因在 短短几年内下降了

9 0 %[

2 ] .1

9 8 9年,赛加羚羊被列 为国家一级重点保护野生动物,1

9 9 5年,赛加羚羊被 列为 《 濒危野生动植物种国际贸易公约》( C I T E S ) 附录Ⅱ物种.在我国民间,山羊 C a p r ah i r c u s 、绵羊 O v i sa r i e s 、藏原羚Procaprapicticaudata、蒙原羚Procaprag u t t u r o s a 、鹅喉羚 G a z e l l as u b g u t t u r o s a和藏羚 P a n t h o l o p s h o d g s o n i i 等的角可当作赛加羚羊角的代用 品使用[

3 ] .中药材市场上,羚羊角被制成粉末、丝 条和片块等形状销售,加上部分商贩有意造假,羚 羊角种类难以识别,给羚羊角贸易监管带来困难, 也不利于监控赛加羚羊等濒危物种的盗猎和走私活 动.目前已有的羚羊角鉴别方法包括形态比较、显 微结构比较[

4

5 ] 、蛋白电泳法[

6 ] 、薄层色谱法[

7 ] 等. 实践中使用较多的是依赖经验判断鉴定的形态比较 法,相比之下,D N A分子鉴定技术具有成熟的、可 重复的实验和统计方法,更为准确、实用.本研究 采用 C O I ( c y t o c h r o m eo x i d a s es u b u n i t