PDF《名称 产品编号 规格》

20 分钟.低温(如4度) 离心会降低细胞得率. 3. 离心后,用吸管小心吸出分离液上层(包含白细胞的细胞层)0.5cm 以上的上清液部分, 弃去. 4. 用吸管小心吸取分离液层、白细胞层及红细胞层置于另一新离心管内. 5. 在步骤

4 中所得离心管中加入 10ml 细胞洗涤液(产品编号:2010X1118)混匀. 6. 250g 离心

10 分钟. 7. 弃上清,沉淀使用红细胞裂解液(Cat#:NH4CL2009)裂解红细胞(裂解过程参见下述 【红细胞裂解液使用说明】 ) . 8. 裂解后再经三次洗涤去除红细胞内溶物和碎片后即为所需白细胞. 9.后以 0.5ml 后续试验所需相应液体重悬细胞. 情况 B: 血液样本大于等于 3ml 时,实验方法如下: 1. 首先按 【注意事项】第4条 所述方法稀释血液样本. 2. 取一支适当的离心管,加入分离液(加入量与稀释后的血液样本体积相等) ,置于 18-22℃. 3. 将经稀释处理的血液样本小心加于分离液之液面上.18-22℃,400g 离心

20 分钟.低温(如4度)离心会降低细胞得率.注:加入血液样本后,样本及分离液总体积不得超过 离心管总体积的三分之二. 4. 剩余步骤同 情况 A 中步骤

3 至步骤 9. 【红细胞裂解液使用说明】 本裂解液有别于市场上销售的其它红细胞裂解液,其配方经过本公司优化在裂解红细 胞的同时不损伤并在一定程度上保护淋巴细胞(lymphocyte)或其它有细胞核的细胞,所获 得的细胞可保持完好的生物活性和完整的细胞形态.另外,本裂解液中无 DNA 及RNA 酶, 配合细胞分离液使用所提细胞可广泛用于细胞培养及分子生物学实验,请广大用户从优选 择. 红细胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer),也称 ACK Lysis Buffer,是一种用于 从人或鼠等的血液或组织细胞样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液. 本裂解液不适用于有细胞核红细胞的裂解,例如鸟或禽类的红细胞.本裂解液经过无菌 处理, 处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的原代培养、 细胞融合以及核酸或蛋白的 提取及各种常规的分析和检测. 使用说明: A. 对于组织细胞样品: a. 新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液,离心弃上清. b. 加入 3-5 倍细胞体积的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解 1-2 分钟.例如细胞沉淀的体 积为 1ml,则加入 3-5ml 的红细胞裂解液.本步骤在室温或

4 度操作均可. c. 400-500g 离心

5 分钟,弃红色上清.4℃离心效果更佳. d. 如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤

2 和步骤

3 一次.通常极微量的红细胞 不 会影响后续的一些检测. e. 洗涤 1-2 次:加入适量 PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀,400-500g 离心2-3 分钟,弃上清.可再重复

1 次,共洗涤 1-2 次.洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀 体积的

5 倍.4℃离心效果更佳. f. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验. B. 对于组织细胞样品无需洗涤的快速操作步骤: a. 新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液,离心弃上清. b. 对于 0.2ml 细胞沉淀加入 1ml 红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解 1-2 分钟.本步骤在室 温或4度操作均可. c. 加入 15-20ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,混匀. d. 400-500g 离心

5 分钟,弃红色上清.4℃离心效果更佳. e. 如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤